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Marcadores celulares: radioisótopos, cromóforos, fluoróforos y otros

Marcadores celulares: radioisótopos, cromóforos, fluoróforos y otros. Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular. Radioisótopos empleados en biomedicina: 3 H, 14 C, 13 C, 32 P, 33 P, 35 S , 125 I, 131 I, 24 Na 1 dps = 1 Bq; 60 dpm = 1 Bq; 1 m Ci = 37 kBq

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Presentation Transcript

  1. Marcadores celulares: radioisótopos, cromóforos, fluoróforos y otros Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular

  2. Radioisótopos empleados en biomedicina: 3H, 14C, 13C, 32P, 33P, 35S , 125I, 131I, 24Na • 1 dps = 1 Bq; 60 dpm = 1 Bq; 1 mCi = 37 kBq • Eficiencia, E = cpm/dpm Radioisótopos: principios generales Técnicas: autoradiografía (histoquímica, electroforesis), centelleo líquido, contaje gamma, trazadores orgánicos (distribución y metabolización).

  3. Propiedades de los radioisótopos 3H 14C 35S 32P 125I T1/2 12.3a* 5730a* 87.4d* 14.3d* 60d* Radiación b b b b g Penetración (aire) 6 mm 24 cm 30 cm 7,2 m > 10 m Escudo No 1 cm 1 cm 1 cm plomo 0.25 mm (13 mm para 131I) Actividad (Bq) 3·1010 9·108 4·109 1·108 1·107 Limite anual (MBq) 3000 90 80 10 1 *a=años, d=días

  4. Cromóforos: la absorción

  5. Ley de Beer-Lambert I = I0 · 10-e c l Log I0/I = A = e · c · l T = 100 · (I/I0) La densidad óptica (D.O.) es la absorción en us sistema en el que l = 1

  6. Cromóforos

  7. Cromóforos: el espectrofotómetro

  8. Cromóforos intrínsecos Determinados grupos prostéticos de proteínas actúan como cromóforos intrínsecos. Su espectro característico sirve para identificar proteínas.

  9. Cromóforos intrínsecos

  10. Fluoróforos: excitación y emisión La molécula A es fluorescente, mientras B carece de fluorescencia. G denota el estado basal; S el primer estado excitado.

  11. Esquema del fluorímetro(Formato en L) Prisma o filtro

  12. Fluoróforos: ejemplos

  13. Fluoróforos: Ejemplos

  14. Ejemplo en microscopia de fluorescencia Medición con Fura-2 de la concentración de Ca2+ en célula de Purkinje.

  15. Fluoróforos: Marcaje Marcaje de proteínas con anticuerpos fluorescentes. Ejemplo de marcaje con anticuerpos primarios y secundarios

  16. Citometría de flujo La citometría de flujo es una técnica ampliamente utilizada para separar, clasificar, analizar e investigar las células

  17. Fluorescencia en la fluidez de membrana Fluidez y difusión mediante FRAP (Fluorescence Recovery After Fotobleaching)

  18. Fluorescencia e Interacción entre moléculas (FRET) FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer)

  19. Fluorescencia en la fluidez de membrana Estudio de la fluidez en híbridos ratón-humano Patching y capping en membranas de leucocitos

  20. Otros métodos de marcaje • Oro coloidal • Biotina-Avidina • Marcaje enzimático • Esferas magnéticas • Marcaje de Spin

  21. Fluorescencia en la fluidez de membrana • EJERCICIO: Describe un experimento en el que uno de los siguientes marcajes sea una buena elección: • Marcaje de una proteína con 125I. • Marcaje de una hormona con 3H.

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