第 3 章单克隆抗体 monoclonal antibody, McAb/mAb

一、单克隆抗体mAb 多克隆抗体：多个抗原决定基——机体——多种抗体的混合物单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）：由一个B细胞克隆产生的、针对某一特定抗原决定簇的高度特异性抗体第3章单克隆抗体monoclonal antibody, McAb/mAb

一、单克隆抗体(McAb) （一）概念: 通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体. B细胞杂交瘤的类型小鼠-小鼠大鼠-大鼠小鼠-人人-人

1.亲本细胞的选择 小鼠骨髓瘤细胞: 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶 (HGPRT) 缺陷型免疫脾细胞: 经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾脏（二）单克隆抗体的生产原理 principle of monoclonal antibody production

2. 细胞融合Cell Fusion 骨髓瘤细胞 PEG 杂交瘤细胞脾细胞融合后细胞的类型: 未融合的脾细胞杂交瘤细胞未融合的瘤细胞

3 杂交瘤细胞的选择性培养 DNA合成的途径：糖+氨基酸氨基喋呤 (Aminopterin, A) 核苷酸DNA 胸腺嘧啶核苷 TKTMP (Thymidine,T) 核苷酸前体次黄嘌呤 HGPRT IMP (Hypoxanthine, H)

融合后细胞在HAT培养基中存活情况 脾细胞（ HGPRT+, TK+, 不能长期生长）骨髓瘤细胞（ HGPRT-, TK-，不能生长）杂交瘤细胞（ HGPRT+, TK+，能够生长）

4. 杂交瘤细胞的筛选和克隆化 筛选：免疫荧光 ELISA等克隆化：有限稀释法单个细胞显微操作法软琼脂培养法

5. 单克隆抗体的生产 体内：BALB/c小鼠体内诱发含有单抗的腹水体外：无血清培养基悬浮培养等 6. 单克隆抗体的纯化硫酸铵沉淀法离子交换层析 A蛋白-Sepharose亲和层析

（四）单克隆抗体的应用 monoclonal antibody application 单克隆和多克隆抗体的比较和用途 1、用于免疫学检测，辅助临床诊断 PcAb McAb 特异性高低 2、McAb用于亲和层析，分离微量可溶性抗原敏感性差强均一性无有 3、标记的McAb用于基础研究，了解细胞分化等 4、制备生物导弹用于肿瘤、移植等的临床治疗。

二、基因工程抗体种类 根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括：嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。

人源抗体的生产过程

小结 • 概念 • 基本结构 • 水解片段 • 功能区 • 生物学活性 • 免疫原性 • 单克隆抗体

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