1 / 17

Horizontální elektroforéza na agarovém gelu

Horizontální elektroforéza na agarovém gelu. MUDr. Michal Jurajda ÚPF LF MU. Agarózový gel. Agarózový gel. Příprava agarózového gelu. Připravit navážku agarózy Za míchání smísit s potřebným množstvím pufru Zvážit Rozvařit Doplnit na původní hmotnost dest. Vodou Zchladit a přidat EtBr.

aiko-cruz
Download Presentation

Horizontální elektroforéza na agarovém gelu

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Horizontální elektroforéza na agarovém gelu MUDr. Michal Jurajda ÚPF LF MU

  2. Agarózový gel

  3. Agarózový gel

  4. Příprava agarózového gelu • Připravit navážku agarózy • Za míchání smísit s potřebným množstvím pufru • Zvážit • Rozvařit • Doplnit na původní hmotnost dest. Vodou • Zchladit a přidat EtBr.

  5. Nalévání agarózy • Připravit nalévací misku (olepit páskou nebo umístit do „formičky“, nasadit hřebínek a zkontrolovat jeho vzdálenost ode dna. • Umístit na vodorovnou podložku. • Nalít agarózu o teplotě cca 40 ºC. • Nechat zchládnout a odstranit hřebínek a pásku

  6. Příprava TBE pufru • 61,8g kys. borité • 121,0g TRIS báze • 7,5g EDTA • Doplnit do 1000ml destilovanou vodou • pH 8,0

  7. Nanášecí pufr • Ficoll • zvyšuje hustotu roztoku, drží roztok na dně jamky • bromfenolová modř • vizualizuje roztok při nanášení a migruje v elektrickém poli • 300 μl bromfenolové modři 0,125% + 30ml vodného roztoku ficollu 15-20%

  8. Barvení DNA v gelu • Ethidium bromid • Zásobní roztok 5mg/ml • Pracovní koncentrace 0,5-1 μg/ml • (1-2 μl zásobního roztoku / 10 ml agarózy)

  9. Intenzita elektrického pole • Obecně 2-10V/cm • Nejčastěji používáme intenzitu 2-4V/cm • !pozor! intenzita elektrického pole se počítá ze vzdálenosti elektrod, nikoliv z rozměrů gelu

  10. Pohyb DNA při elektroforéze • Elektrické pole • Difúzní pohyb

  11. + -

  12. Vizualizace a archivace obrazu

  13. Elektroforéza v agarovém gelu

  14. Jak zajistit co nejlepší výsledek? • Nenanášet velké množství DNA • Nepoužívat zbytečně vysoké napětí • Volit správný druh a koncentraci agarózy • Recyrkulace pufru • Chladit elektroforézu

More Related