ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO

1. ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO PROYECTO DE GRADO PREVIO LA OBTENCIÓN DE TÍTULO DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

2. Estudio de la robustez de los protocolos para la preparación de muestras orgánicas e inorgánicas a ser observadas bajo los microscopios electrónicos de barrido y de transmisión Elaborado por: Sara Guerra Sangolquí, Febrero 2012

3. Índice 1. Generalidades 2. Materiales y métodos 3. Resultados 4. Discusión 5. Conclusiones 6. Recomendaciones 7. Bibliografía

4. Generalidades Procesos de absorción, difracción, interferencia y límite de resolución

5. Proceso de Absorción Bibliografía: [3], [5], [6], [27],

6. Difracción e interferencia Bibliografía: [6], [8], [27], [46], [54]

7. Límite de resolución: Bibliografía: [25], [46] [,63]

8. Límite de resolución Dispositivos de grabación Bibliografóa: [6]

9. Generalidades Interacción de los electrones con la materia

10. Interacción de los electrones con la materia Bibliografía: [56]

11. Interacción de los electrones con la materia Electrones Secundarios Más comunes en topografía y alta resolución. Un e- primario desaloja un e- de la superficie de la muestra. e- de valencia se propagan por la muestra experimentando colisiones inelásticas. Poseen bajo nivel de energía. Bibliografía: [17], [27], [65]

12. Interacción de los electrones con la materia Electrones retro dispersos Depende de la composición y superficie topográfica, transporte y escape. Alto nivel de energía. Debido a colisiones con átomos de muestra, regresan a través de la superficie y vuelve a salir. Sus señales vienen de capas atómicas por debajo. Bibliografía: [17], [56], [65]

13. Interacción de los electrones con la materia Rayos X continuos Rayos x característicos Resultan de la desaceleración de electrones. Debido al efecto de “frenada” se los conoce como Bremsstrahlung. Pierden energía en un solo evento de desaceleración. e- de una capa interna del electrón es desplazado por una colisión con el electrón primario, un electrón de una capa externa cae en la vacante de la capa interna para establecer la carga correcta en los orbitales del electrón seguido con un evento de ionización Bibliografía: [17], [56], [65], [27]

14. Generación de rayos X Bibliografía: [56]

15. Interacción de los electrones con la materia Electrones Auger El exceso de energía liberada es absorbida por electrón de capa externa y provoca expulsión del mismo. Este electrón liberado es el electrón Auger. Se diferencian de los rayos X característicos en la manera de liberarse de la superficie Bibliografía: [17], [56], [65]

16. Generalidades Características generales para la obtención de una imagen

17. Sistema de generación del haz de electrones y su manipulación • Se utiliza un cañón de electrones que genera el haz de “iluminación” conocido como haz primario de electrones. • Suficiente Ec para pasar a través de la muestra. • Se toma en cuenta que: altos voltajes dan mejor resolución y mayor es el calor que genera en la muestra. Bibliografía: [17], [20], [27]

18. Bibliografía: [18]

19. Bibliografía: [18]

20. Sistema de generación del haz de electrones y su manipulación Bibliografía: [17], [20], [27]

21. Sistema de generación del haz de electrones y su manipulación Bibliografía: [17], [20], [27]

22. Diagrama de los componentes que conforman el cañón de electrones: filamento, cilindro Wehnelt y ánodo Bibliografía: [56]

23. Sistema de generación del haz de electrones y su manipulación • Los lentes electrostáticos se forman cuando los campos positivos y negativos están cerca uno de otro; esto es lo que sucede entre el cañón y el ánodo • Mientras atraviesan el resto del MEB o del MET los electrones son controlados por los lentes electromagnéticos Bibliografía: [17], [27], [56], [65]

24. Sistemas de lentes Bibliografía: [56]

25. Generalidades Preparación de muestras

26. Preparación de muestras • MET analiza: cortes de tejido pequeños (1-3 mm2) y muy delgados (30-80 nm) ya que el poder de penetración de los electrones es muy limitado. • Muestra en MEB debe deshidratarse y cubrirse con película delgada de un metal noble para que sea conductora. Bibliografía: [5],[17], [20], [25], [27], [30], [32], [43], [60], [65]

27. Preparación de muestras para el MEB Bibliografía: [5],[17], [20], [25], [27], [30], [32], [43], [60], [65]

28. Preparación de muestras para el MEB Bibliografía: [5],[17], [20], [25], [27], [30], [32], [43], [60], [65]

29. Preparación de muestras para el MET Bibliografía: [5],[17], [20], [25], [27], [30], [32], [43], [60], [65]

31. Preparación de muestras para el MET Bibliografía: [5],[17], [20], [25], [27], [30], [32], [43], [60], [65]

32. Generalidades Robustez de un protocolo

33. Robustez de un protocolo Bibliografía: [4], [12], [36], [49], [51]

34. Materiales y métodos Laboratorio de Microscopía Electrónica de la ESPE y en el Instituto Nacional de Higiene y Medicina Tropical Leopoldo Izquieta Pérez.

35. Materiales y métodos Protocolos para muestras inorgánicas

36. Protocolos para muestras inorgánicas Nanopartículas de hierro cero valente y de sulfuro de hierro. Se probaron varios protocolos para la preparación de las rejillas de cobre

37. Protocolos para muestras inorgánicas Protocolo para la preparación de nanopartículas de hierro cero valente y de sulfuro de hierro

38. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para la preparación de bacterias

39. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para la preparación de bacterias

40. Bibliografía: [31]

41. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para la preparación de virus de plantas

42. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para la preparación de virus de plantas Microscopio electrónico de transmisión Joel Jem 1010 a 80 kV.

44. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para cortes ultra finos

45. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para cortes ultra finos

46. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para cortes ultra finos

47. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para cortes ultra finos

48. Bibliografía: [44]

49. Bibliografía: [44]

50. Protocolos para muestras orgánicas Protocolo para cortes ultra finos