550 likes | 734 Views
DNA reparasjon. Seter i DNA som kan modifiseres kjemisk. Spontan hydrolyse. Angrep av reaktive oksygenmolekyler (ROS). * Nukleofile sentere som lett reagerer med eksogene og endogene elektrofile forbindelser, f. eks. alkyleringsmidler. DNA skader Base-endringer.
E N D
Seter i DNA som kan modifiseres kjemisk Spontan hydrolyse Angrep av reaktive oksygenmolekyler (ROS) * Nukleofile sentere som lett reagerer med eksogene og endogene elektrofile forbindelser, f. eks. alkyleringsmidler
DNA skader • Base-endringer. • Deamineringer, alkyleringer, dimeriseringer • Trådbrudd. • Enkle og doble brudd i fosfodiester-kjeden • Kryssbindinger. • Mismatches. • Inkorporering av feil nukleotid ved replikasjon • Endring av en base (se punkt 1.)
Base-endringer. • Basen faller ut pga. angrep på den glykosidiske bindingen • til sukkeret (AP-seter). Spontan og svært hyppig. • Deaminering (C U). • - Oksydative skader (8-oxo-G) • Alkylering (3-metyl-A, O6-metyl-G) • - Strålingsinduserte (TT-dimerer)
Metylering av Guanin i O6-posisjon er mutagent G C O6met-G T
2. DNA Trådbrudd • Enzymatisk • (ved reparasjon, replikasjon, rekombinasjon) • Ytre påvirkning • (kjemikalier, ioniserende stråling).
3. Kryssbindinger Innen samme tråd (intrastrand) Mellom to tråder (interstrand) Eller addukter til andre molekyler. Induseres av kjemikalier og av kjemikalier + lys.
4. Mismatches To baser som ikke baseparer. Utfordringen er å finne hvilken som er feil og fjerne den.
Metoder til å reparere base-skader Fjerne et addukt Fjerne den skadde basen Fjerne en lengre sekvens
Mekanismer for DNA reparasjon • Direkte reversering • Et enzym – fotolyase – binder seg til • tymin-dimeren og splitter den. • Energi: absorbert synlig lys. • Et addukt (typisk en metylering) overføres • til et reparasjons -”enzym”.
Ada – et selvmordsenzym Ada-proteinet (E. coli) gjenkjenner metylerte baser (3-metyl-adenin) og overfører metyl-gruppen til seg selv. Proteinet kan da IKKE brukes om igjen, og er strengt tatt ikke et enzym.
Xeroderma Pigmentosum En sykdom der pasientene har en genetisk defekt i Excision Repair. Symptomer: Nevrologiske problemer, ekstrem følsomhet forlys, høy frekvens av kreft.
Excision repair er mest effektiv på den tråden som blir transkribert. (’transcription-coupled repair’) Grunn: RNA polymerase bidrar til markering av DNA-skader. Reparasjonen er trådspesifikk og genspesifikk.
Base Excision Repair (BER)
Mismatch repair. Når feil nukleotid blir satt inn ved replikasjon, vil vanligvis polymerasen selv fjerne den (’proofreading’). Hvis det IKKE skjer, kan nukleotidet fjernes med Mismatch Repair.
Mismatch repair in E. coli (GATC)
Mismatch repair i E. coli • MutS bindes til DNA som inneholder en mismatch • MutL bindes og stabiliserer. Nødvendig for aktivering av • MutH, en ss nuklease som gjenkjenner og kutter den ikkemetylerte tråden i hemimetylerte GATC-seter. • Det påfølgende utkuttingstrinnet krever UvrD, en ATP-avhengig helikase, og en ss eksonuklease (Exo I, Exo VII eller RecJ) for fjerning av DNA-tråden med skaden. • En ny tråd syntetiseres av DNA pol III
Reparasjon av mismatch med 8-oxoguanine (Nature, februar 2004)
Uracil i DNA blir gjenkjent og fjernet. Uracil DNA glycosylase kodes av genet ung. Enzymet flipper uracil ut av DNA-helixen før den kutter det glykosidiske båndet. Dette er sannsynligvis mekanismen for alle DNA glykosylaser.
Enkelttrådbrudd i DNA repareres via en slags excision repair, for en tråd er uskadd. Men hva med dobbelttråd-brudd?
Et eksempel på mislykket rekombinasjon. Resultat: Kreft
DNA skade Regulering av cellsyklus DNA reparasjon Aktivering av transkripsjon Skade-toleranse Apoptose