Chromatographie sur couche mince.

1. Chromatographie sur couche mince. Identification des composants de l’aspartame.

2. But du TP: • Identifier les différents composants de l’aspartame par chromatographie sur couche mince.

3. Principe du TP: • La chromatographie sur couche mince va permettre de séparer les constituants de l’aspartame en fonction de leur affinité pour deux phases non miscibles ( phase stationnaire et phase mobile).

4. Préparation de la chromatoplaque Sur une plaque de gel de silice de 5 x 9 cm, tracer légèrement et sans appuyer au crayon de papier une ligne de dépôt à 1,5 cm du bord inférieur de la plaque Marquer très légèrement les emplacements des dépôts (6 dépôts) en laissant 0,7 cm de chaque côté de la plaque et 0,7 cm entre les dépôts

5. Préparation de la cuve • Verser 15 mL d’un mélange de solvants n-butanol (75 Vol.), acide acétique (20 Vol.) et eau (20 Vol.), soit une hauteur d’environ 1 cm de solvant. • Attendre environ 10 minutes que les vapeurs de solvants saturent la cuve.

6. Préparation de l’aspartame Dissoudre deux comprimés d’aspartame dans 10mL d’eau déminéralisée.

7. Dépôts des solutions • A l’aide de pipettes Pasteur, déposer les différentes solutions comme indiqué ci-contre. Les dépôts sont faits en deux fois et ne doivent pas trop s’étaler.

8. Développement du chromatogramme • Introduire la plaque dans la cuve saturée de solvant: la ligne de dépôt doit se trouver au dessus du niveau de la ligne de solvant. • Laisser migrer jusqu’à ce que le front du solvant se trouve à 1 cm du bord supérieur de la plaque (1h30 environ). • Sortir le chromatogramme, marquer légèrement la position du front de solvant au crayon de papier (pensez à identifier votre chromatoplaque). • Porter 10 min à l’étuve à 100°C.

9. La notion de Rf: • Le Rf est aussi appelé le rapport frontal. • Rf est égal à la distance de migration de la substance d’analyse sur la distance de migration du solvant. • Le rapport frontal est donc égal à :

10. Rfde chaque composé

11. Analyse des résultats • Suite à la pulvérisation nous observons l’apparition de plusieurs spots. D’après ceci nous pouvons déterminer la composition de l’aspartame. • La migration de l’aspartame non hydrolysé ne permet pas de connaitre les différents composants de l’aspartame. • En regardant la migration des différents composés et en les comparant à celle de l’aspartame hydrolysé nous pouvons en déduire que l’aspartame est composée de: - phénylalanine -acide aspartique

12. Détermination de la structure de l’aspartame • Les deux acides aminés sont liés par une liaison peptidiques unissant des groupements portés par leur carbone Phénylalanine Acide aspartique Liaison peptidique

13. Le radical de l’acide aminé N-terminal n’absorbe pas la lumière UV • Nt Ct • L’acide aminé C-terminal est lié par une liaison ester à du méthanol Liaison ester

14. L’hydrolyse de l’aspartame • L’hydrolyse de l’aspartame dans l’échantillon est totale étant donné que nous retrouvons différents acides aminés et qu’il n’y a pas de spot inconnu sur la plaque.

15. Pouvoir sucrant de l’aspartame • Poids net d’un comprimé : 29,25/650 = 0,045g = 45 mg • Pourcentage d’aspartame dans un comprimé : 45x44/100 = 19,8mg • Pouvoir sucrant : Sachant qu’un comprimé a le même pouvoir sucrant que 4g de sucre 4000/19,8 = 202