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ESTRUCTURA, PROPIEDADES Y FUNCIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS. Transferencia de Material Genético: Conjugación. Transmisión de Material Genético. Transformación. Una célula bacteriana toma DNA del ambiente y lo incorpora. De manera natural en Gram +. Transducción.
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ESTRUCTURA, PROPIEDADES Y FUNCIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS Transferencia de Material Genético: Conjugación
Transformación • Una célula bacteriana toma DNA del ambiente y lo incorpora. • De manera natural en Gram +.
Transducción • Involucra presencia de fagos, los cuáles transfieren el DNA de la célula donadora a la célula receptora, la cual puede incorporarlo a su cromosoma. • Ciclo Lítico.
Conjugación • Una célula bacteriana transfiere DNA a otra célula bacteriana, por contacto directo célula a célula. • DNA transferido: Parte del genoma ó un plásmido.
Descubrimiento de la Conjugación ¿Las bacterias tienen procesos similares a la reproducción sexual y la recombinación? Joshua Lederberg y Edward Tatum (1946) descubren un proceso similar…
Descubrimiento de la Conjugación “Las bacterias absorbían lo que secretaban las otras, y podían crecer…” Bernard Davis: Contacto celular es necesario.
Plásmidos Escherichia Pseudomonas Gram - Plásmidos autotransmisibles Enterococcus Streptococcus Bacillus Staphylococcus Streptomyces Gram + Sistemas de transferencia: codificados por los genes tra del plásmido
Conjugación: Gram - • E. coli. • Plásmido F: factor de fertilidad, impone la capacidad de donar material genético: Célula donadora (F+), Célula receptora (F-). Dtr Preparación del plásmido Genes tra • Largo y flexible: transferencia en medio liquido • Corto y rígido: transferencia en medio sólido Sistema que mantiene unidas a las células donadora y receptora durante el apareamiento Pili Mpf
Conjugación: Gram - • F+ y F-: Ambas células se vuelven F+ CONJUGACIÓN
Conjugación: Gram - • F+ y F+: Se inhiben por contacto CONJUGACIÓN
Conjugación: Gram - • Hfr (alta frecuencia de recombinación): el plásmido se integra al cromosoma bacteriano. Sigue siendo donadora.
Conjugación: Gram - • Hfr y F-: no se transfiere el cromosoma completo, la parte del plásmido F se escinde.
Conjugación: Gram - • F’: Se escinde el plásmido F y se lleva consigo una parte del cromosoma. plásmido F’, donador.
Conjugación: Gram - • F’ y F-: Se generan células diploides parciales , la receptora se llama merocigoto y sigue siendo F-. CONJUGACIÓN
Conjugación Gram + • Similar a lo que ocurre con Gram -. • Sistema Mpf, es más simple. • E. faecalis secretan péptidos parecidos a feromonas que estimulan la expresión de genes traen las bacterias vecinas.
Conjugación ¿Para qué? ¿Cómo seleccionamos? Genes marcadores, dentro del plásmido y permite seleccionar colonias conjugantes por fenotipos:auxotrofías, fuente de energía, resistencia/susceptibilidad a antibióticos • Resistencia: antibióticos, metales pesados • Colicinas y Bacteriocinas: proteínas con actividad antimicriobiana. • Factores de virulencia: Toxinas. • Actividades metabólicas: Síntesis ó degradación de compuestos carbonados
En la práctica… E. coli JM1452StrR Resistente a Estreptomicina. No codifica para el pili (genes tra), por lo tanto es... E. coli W3110/F´KmTn3 Resistente a la Kanamicina. Cepa F’, por lo tanto es… RECEPTORA DONADORA
En la práctica… 600 µL 300 µL 120 µL Resistente a Estreptomicina Resistente a Kanamicina
Eficiencia de conjugación #CT: Número de Colonias Transconjugantes #CP: Número de Colonias Parchadas