Le proteine Nhp6 nell’invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

1. Le proteine Nhp6 nell’invecchiamento cronologico di S.cerevisiae 23/10/2014 Candidato Adriano Bolondi 1491129 Relatore Prof. Giorgio Camilloni A.A 2013-2014

2. I DUE MODELLI DI INVECCHIAMENTO DI S.cerevisiae Invecchiamento cronologico Invecchiamento replicativo 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

3. LA STRUTTURA DELLA CROMATINA 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

4. LE PROTEINE NHP6 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

5. STUDI RECENTI SU nhp6a/bΔ (1) • Celona et al., 2011 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

6. STUDI RECENTI SU nhp6a/bΔ (2) CFU/CFU 1°gg Durano et al., 2014 (in preparazione) 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

7. OBIETTIVO DELLA TESI Alla luce dei risultati appena mostrati e data la mancanza di informazioni disponibili in letteratura per quanto riguarda il fenomeno dell’invecchiamento cronologico di S.cerevisiaee della sua regolazione, questo lavoro di ricerca si è concentrato sull’analisi dei singoli mutanti nhp6aΔe nhp6bΔin fase stazionaria, per cercare di evidenziare particolari fenotipi specifici. A tal fine abbiamo pensato a tre diverse indagini: Crescite cronologiche dei due ceppi mutanti; 2. Western Blot contro H4K16Ac; 3. Analisi dei trascritti nhp6a e nhp6b mediante RT-qPCR 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

8. 1. CRESCITE CRONOLOGICHE DEI DUE CEPPI MUTANTI nhp6aΔe nhp6bΔ 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

9. 2. WESTERN BLOT CONTRO H4K16Ac H4K16Ac 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

10. NORMALIZZAZIONE DEI SEGNALI DEL WB RISPETTO ALLE PROTEINE TOTALI 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

11. 3. ANALISI DEI TRASCRITTI nhp6a E nhp6b MEDIANTE RT-qPCR 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

12. CONCLUSIONI L’analisi delle CLS evidenzia come il mutante nhp6bΔabbia minor capacità di originare colonie su terreno fresco rispetto ad nhp6aΔ; Il Western Blot contro H4K16Ac mostra come il mutante nhp6bΔsia acetilato non solo più abbondantemente ma anche più precocemente rispetto ad nhp6aΔ; Dall’analisi dei trascritti si evince come la presenza della proteina Nhp6Bp possa avere un ruolo nel regolare la trascrizione di nhp6a, la cui overespressione nel mutante nhp6bΔpuò risultare in tossicità per la cellula. Questi risultati mostrano come il ceppo nhp6bΔvada incontro ad invecchiamento cronologico precoce rispetto ad nhp6aΔ, dimostrando il ruolo fondamentale svolto dalla proteina Nhp6Bp nel mantenere la durata della vita cronologica di S.cerevisiae. 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

13. Ringraziamenti Ringrazio vivamente per tutto l’aiuto datomi in questi mesi tutti i ricercatori del lab. 39 Prof. Giorgio Camilloni Francesca Di Felice Andrea Luckacs Anna D’Alfonso Alessandra Tramutolo Chiara Gargiuli Valentina Carlini Un ringraziamento particolare va a Diletta Durano per avermi guidato e supportato durante tutto il periodo del mio lavoro sperimentale dentro e fuori dal laboratorio. 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

15. WESTERN BLOT CONTRO H4 nhp6aΔnhp6bΔ 1°gg 3°gg 7°gg 1°gg 3°gg 7°gg 14kDa 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae

16. TRASCRITTI PER GLI ISTONI 23/10/2014 Le proteine Nhp6 nell'invecchiamento cronologico di S.cerevisiae