Extraction of Sulfa Drugs in Honey with Polymeric SPE Cation Exchange, Bond Elut Plexa™ PCX

1. new part of Agilent Bond Elut PlexaTM PCX (Polymeric SPE Cation Exchange)를 이용한 꿀에서의 설파제(Sulfa Drugs) 추출 Extraction of Sulfa Drugs in Honey with Polymeric SPE Cation Exchange, Bond Elut Plexa™ PCX Introduction 최근 농식품에서의 항생제와 다른 약물들은 알레르기가 있거나 민감한 소비자에게 심각한 해를 끼치거나 죽음에까지 이르게 하는 문제를일으키고 있다. 최근 몇 년 동안, 꿀이 만들어지는 곳에서 항생제와 설폰아미드의 잔여물로 오염되는 문제가 나타나고 있다. 이러한 오염물질들은 미국이나유럽에서 부저병(foulbrood) 및 nosemosis와 같은 꿀벌의 박테리아성 질병을 치료한 후에 발생한다. 이 문제를 해결하기 위해, 몇몇 국가들은 설폰아미드의 사용 규제와 꿀에서 설폰아미드의 존재 여부를 정기적으로 시험하도록 하고 있다. 꿀은 대부분 탄수화물과 물로 이루어져 있는 복잡한 매트릭스를 가지고 있다. 우유같이 점성이 적은 시료와는 반대로 꿀같이 점성이 있는 시료를 SPE에 사용하려면, SPE를 사용하기 전에 초음파 처리(sonication) 및 산성화 단계가 추가되어야 한다. 이 자료에서는 Cation exchange SPE와 LC/MS/MS를 이용하여 꿀에서의 설파제(sulfa drugs)를 추출·분석 하였다. Materials and Reagents SPE Reagents and Solutions 4 % phosphoric acid, Methanol , 2 % Formic acid, Methanol : acetonitrile (1:1, v:v) 5% NH4OH Methanol : acetonitrile, Bond Elut Plexa PCX(10mg, 96 well plate, P/N A4968010) SPE Method Results and Discussion 그림 1에는 꿀로부터 4종류의 설폰아미드 항생제를 추출한 크로마토그램을나타내고 있다. SPE와 LC/MS/MS 분석의 검출한계(limit of detection ; LOD)는 25ng/g이다. 회수율은 6개 시료의 RSD 값과 1차 회귀로부터 산출하였다. 완벽한 회수율은 좋은 머무름(retention)과 용리(elution), 최소한의 이온 억압(ion suppression)으로 입증되어 이루어진다. 모든 화합물의 반응은 1.0ng/mL ~ 5.0mg/mL에서 3단계의 검량선을 작성한 결과 0.999이상의 상관계수를 나타내었다. 재현성을 평가하기 위하여, 시료는 각농도에 대하여 2번 분석하였다. 표 1에서는추출 절차에 대한 높은 회수율을 보여주고 있다. Sample 1.0g 꿀(honey) Pre-treat 1mL 4% H3PO4를 첨가하여 20분 동안 초음파 처리 → 3mL 2% H3PO4로 희석 Condition 500㎕ CH3OH → 500㎕ H2O Wash 1 500㎕ 2% Formic acid 표 1. 분석물의 회수율 Wash 2 [acids, neutral] 500㎕ 1:1 methanol : acetonitrile Elution [base] 500㎕ 5% NH3 methanol : acetonitrile 모든 시료들은 증발시켜 80:20 0.1% Aq formic acid : CH3OH 100㎕로 용매 전환한다.

2. Conclusion Bond Elut Plexa PCX는 꿀과 같이 어려운 절차를 갖고 있는 작업을 할 때 가장 적합한 제품이다. Bond Elut Plexa PCX를 이용하여 꿀에 존재하는 4종류의 설파제에 대하여 회수율이 100%에 달하는 빠르고 효과적인 분석을 하였다. 이러한 데이터는 Bond Elut Plexa PCX가 음식물과 복잡한 매트릭스를 가진 물질로부터 sulfa 및 유사한 약물을 추출하는데 적합하다는 것을 보여주고 있다. 그림 1. 50ng/mL로 추출한 크로마토그램 • 자세한 사항은 원문을 참고하세요. • 원본보기 : Application Note SI-01120.pdf • 제품보기