1 / 20

HLA Typing

HLA Typing. ▶ HLA 에 대하여 ▶ Crossmatching 에 대하여. HLA (Human Leukocyte Antigen). ▶Class1-A,B,C:T-lymphocytes ▶Class2-DR,DP,DQ:B-lymphocytes ▶Class3-C2,C4,TNF(tumor necrosis factor) ▶ 사람의 MHC(major histocompetibility complex) 에서 생성되는 분자 ▶ HLA 의 다형성 (polymorphism)

cade
Download Presentation

HLA Typing

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. HLA Typing ▶ HLA 에 대하여 ▶ Crossmatching 에 대하여

  2. HLA (Human Leukocyte Antigen) ▶Class1-A,B,C:T-lymphocytes ▶Class2-DR,DP,DQ:B-lymphocytes ▶Class3-C2,C4,TNF(tumor necrosis factor) ▶ 사람의 MHC(major histocompetibility complex)에서 생성되는 분자 ▶ HLA의 다형성(polymorphism) ▶ HLA 분자내 항원 결합부위-T 세포의 항원 수용체 인식부위에 밀접

  3. HLA 유전자 ▶사람의 제 6번 염색체의 단완부에 위치 ▶인체 세포의 표면에 존재하는 당단백 분자 ▶유전 haplotype (일배체형): 동일 염색체상에있는 HLA항원의 조합이며, 일배체형으로 유전함 부모 자식간에는 50% 유사 형제 자매간 일치 확률은 25% 타인간의 일치확률은 2-3만분의1

  4. 6번 chromosome • + Class II + +------ Class III - - - -------------+ + Class I+ • DP DQ DR 21B C4B 21A C4A BF C2 TNF B C A • ---------------------------------------------------------------------------------- <MHC gene complex on chromosome 6>

  5. HLA haplotype • (부) (모) (부) (모) • ab cd A24 ||A24 A2 || A11 • | | Cw1 ||Cw8 Cw3 || Cw6 • +---------------+ B5 ||B55 B46 || B13 • +-------+-------+--------+ DR4 ||DR8 DR9 || DR7 • | | | | a b c d • ac ad bc bd • HLA-identical : 25% chance • HLA-semi-identical : 50% chance • HLA-nonidentical : 25% chance

  6. HLA 형별 검사 이용 ▶ 장기이식: 적절한 장기 공여자 선정 ▶ 질병진단: 강직성 척추염(B27),혈색소증(A3) 류마티스관절염(DR4),Narcolepsy(DR2), Behcet’s disease(B5) … ▶ 법의학적: 친자감별, 범인검색 ▶ 면역학연구 ▶유전학적연구:인류학연구

  7. Crossmatch 원리 ▶ 미세림프구 독성 검사 ( microlymphocytotoxicity)

  8. Crossmatch 목적 ▶ 초급성 거부반응(hyperacute rejection)의 예방 ▶ 이식된 장기의 생존 예측 ▶ 장기이식 전 HLA 항체 존재 유무

  9. Crossmatch 채혈량 ▶ 환자(Recipient) ACD tube 7ml (4개) plain tube 3ml (1개) ▶ 공여자(Doner) ACD tube 7ml (4개) plain tube 3ml (1개)

  10. Crossmatch 검사 준비 ▶ 대조혈청 (control) ▶ 환자의 T cell, B cell ▶ 공여자의 T cell, B cell ▶ 환자와 공여자의 혈청 ▶ column ▶ 10%FBS(fetal bovine serum)

  11. 환자, 공여자의 림프구 분리 ▶ 원리: 비중원침법(density gradient centrifugation) ▶ 검사에 맞는 세포 상태 림프구 순도: 80% 이상 세포수:2,000~3,000/L 생존율:80% 이상

  12. RPMI로 중첩후 원심분리한 사진 Neubauer chamber

  13. T cell, B cell 분리 ▶ T cell 분리: B 림프구의 nylon 흡착 성질을 이용하여 분리된 림프구를 nylon wool column에 넣어 37℃ water bath 안에 있던 10% FBS-RPMI로 씻어낸다 이때 손이흔들리면안된다(B cell 이떨어지기때문) ▶ B cell 분리: column내에 nylon을 물리적인 충격을 주며 column을 씻어낸다.

  14. Coulmn and nylon

  15. T-Cell 과 B-Cell 을 분리하는모습

  16. Microplate 분주

  17. 검사 과정

  18. 임상적 의의 ▶초급성 거부반응의 원인 ▶ 음성 반응을 확인한 후에 장기이식을 시행 ▶T 림프구에 대한 항체가 양성인 경우: 이식 금기 ▶ B 림프구에 대한 항체가 양성인 경우: 이식 금기 사항은 아니지만 높은 역가일 때 이식 성적이 불량

  19. 염색 전후의 Microplate, inverted microscopy

  20. Hemilton sylringe , 5% Eosin-Y

More Related