Evaluación morfológica y funcional de fibroblastos periodontales sometidos fuerzas ortodóncicas

1. Evaluación morfológica y funcional de fibroblastos periodontales sometidos fuerzas ortodóncicas Directora: María Victoria Aguirre Personal de Investigación: María Alejandra Gili; Karina Latyn; María Silvia Almirón Personal de Apoyo: Marcela Solís; Elisa Picek

2. Introducción Este trabajo pretende evaluar las modificaciones tanto morfológicas como funcionales que experimentan los fibroblastos del ligamento periodontal de piezas dentarias sometidas a fuerzas ortodóncicas, aportando la información necesaria respecto a como responde este linaje celular a la aplicación de fuerzas permitiendo decidir por el tratamiento mas adecuado. Los estudios de los tejidos periodontales sanos y enfermos por medio de microscopia electrónica y otras técnicas ultra estructurales han contribuido a un entendimiento más completo de las reacciones hísticas involucradas y a la caracterización de los componentes tisulares. Los análisis permiten una evaluación del estado funcional del tejido periodontal y un cálculo de la fracción de volumen que ocupan las células y los componentes intercelulares durante la aplicación de fuerzas. Los cultivos celulares permiten avanzar en el conocimiento de la fisiología celular, y estudiar los procesos de reparación tisular. Es importante conocer y analizar los posibles mecanismos o alteraciones que se presentan a nivel tanto de la célula como de los componentes de la matriz extracelular por medio de cultivos celulares in vitro, los cuales permiten observar el comportamiento de las células del ligamento periodontal humano y para ello es necesario lograr su crecimiento, con técnicas y medios adecuados para su proliferación y de esta manera llegar a conclusiones que puedan dar aportes a la Ortodoncia y terapia periodontal.

3. Objetivos General: • Analizar a través de distintos métodos las variaciones morfológicas y funcionales de fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas. Específicos: • Describir las características del tejido conectivo periodontal y de los fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas mediante Microscopía Óptica con técnicas de coloración histológica convencionales (Hematoxilina-Eosina) y especiales (Tricrómica de Masson). • Describir las características del tejido conectivo periodontal y de los fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas mediante la Microscopía Electrónica de Barrido • Estandarizar la metodología de aislamiento de fibroblastos periodontales humanos. • Establecer los índices de celularidad y viabilidad de fibroblastos periodontales sometidos a fuerzas ortodóncicas. • Optimizar las distintas fases de la técnica de cultivo de fibroblastos del ligamento periodontal humano in vitro para evaluar la diferenciación y proliferación de estas células en grupo control y grupo sometido a fuerzas ortodóncicas.

4. Materiales y Método • Estudio descriptivo • Muestras de tejido periodontal de pacientes sistémica y periodontalmente sanos en los cuales se requiere de exodoncia de las piezas dentarias que fueron previamente sometidas a fuerzas ortodóncicas. Servicio de Ortodoncia FOUNNE. • Las muestras de tejido serán utilizadas para realizar: 1) Observación al Microscopio Óptico con Coloraciones convencionales con Hematoxilina-Eosina ( H/E) y Coloraciones especiales como Tricrómica de Masson. Servicio de Anatomía Patológica .Cátedra de Histología FOUNNE - Registro fotográfico y descripción las estructuras 2) Observación con Microscopía ElectrónicaServicio Microscopía Electrónica de Barrido de la Fac. de Cs. Agrarias de la UNNE. - Descripción las estructuras -

5. 3) Aislamiento y cultivo de fibroblastos periodontales Cátedra de Química Biológica II de FaCENA - medio de transporte con solución de PBS (buffer fosfato salino) y antibióticos - se realizará el lavado y desinfecciónen cabina de flujo laminar - el material obtenido se deposita en cajas de cultivo celular. - disgregación enzimática del tejido -seañadirá medio DMEM suplementado - se centrifugará la suspensión celular - eliminación del sobrenadante y el pellet obtenido se suspenden 1 ml de medio DMEMs • Determinación de la Viabilidad celular: método de coloración de Trypan Blue (0.4 %) . Relación entre el número de células vivas/numero de células totales • Determinación de la Celularidad: con solución de Turk en una dilución 1:200. Permite contar las células refringentes nucleadas en un hemocitómetro (cámara de Neubauer). Los resultados serán expresados como 1x 106 fibroblastos/ml de suspensión

6. Tareas realizadas ► Etapa Inicial del Proyecto: • Investigación bibliográfica del estado del conocimiento en la temática abordada. • Entrenamiento en técnicas de obtención adecuada de muestras • Preparación de medios de transporte. • Manejo de test de conteo celular. • Selección de casos

7. Bibliografía Consultada • Lehm, Andreas. “Histología dentaria y periodontal: fundamentos para el tratamiento en odontología”. Quintessence (Edición española). Volumen XX, No. 2 (129-135) • Gutiérrez Salinas, J. y colab. “Cambios en la expresión de laminita en el ligamento periodontal en dientes sujetos a tensión ortodóntica en humanos”. Revista de la Asociación Dental Mexicana. Vol. LXII, No. 5 Septiembre-Octubre 2005 pp 171-176. En: http://www.medigraphic.com/espanol/e-htms/e-adm/e-od2005/e-od05-5/em-od055c.htm. • Arnold, L.; Baram,P. “In Vitro Culture of Periodontal Ligamnet Cells”. Journal Dental Research. Vol 51 Nº4. pag. 953-959. July-August 1972 • Soto Franco,J y colab. “Cultivo y Caracterización In Vitro de una Línea Celular de Fibroblastos Gingivales Humanos.” Revista de Estomatología. Volumen 9 No. 1- (27-32) Julio2000. En :http://odontologia.univalle.edu.co/revista1/publicaciones/09-01-2000/pdf/ 03v09n01-00.pdf • Martínez Cardozo, C y colab. “Normalización de cultivos celulares de ligamento periodontal humano a partir de explantes”. En: http://encolombia.com/odontologia/foc/foc20202-normalizacion. • Somerman, M.J y colab. “A comparative study of human periodontal ligament cells and gingival fibroblasts¨”. Journal of Dental research. 67. issue 1. (66-70). Enero 1998. • Moreno,G. y colab. “Efecto de la capsaicina sobre la proliferación y ciclo celular de fibroblastos pulpares humanos “2002. En: www.encolombia.com/odontologia/foc/foc20302-efecto.htm • Traverso Martínez, A. y colab. “Efecto de la cotinina en la viabilidad de fibroblastos”. Acta odontológica venezolana. Volumen 42. Nº1. 2004. En: http://www.actaodontologica.com/ ediciones/2004/1/efecto_cotinina_viabilidad_fibroblastos.asp • Gonzalez, O. “Fenómenos clínicos e histológicos asociados a la magnitud de la fuerza ortodóncica”. En www.javeriana.edu.co/Facultades/Odontologia/posgrados/ortodoncia/ • articulosrevision/11_revision.html. • Guercio de Dinatale, Elisabetta. Biología del movimiento dentario ortodóntico: Revisión de conceptos.Acta Odontológica Venezolana. [online]. ene. 2001, vol.39, no.1 [citado 25 Febrero 2008], p.61-65. Disponible en la World Wide Web: <http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid. • Garat, J.A, Gordillo, M.E., Ubios, A.M “Effect of orthodontic forces on root resorbtion in molars submitted to experimental periodontitis”. Acta Odontológica Latinoamericana. Vol 17. nº 1-2 (pág 3-7). 2004 • Theilig,C.;y colab. “Effects of Mechanical Force on Primary Human Fibroblasts Derived from the Gingiva and Periodontal Ligament”. Journal Dental Research. Vol 80 (8). 1777-1780. 2001 • Garat, J.A., Martín, A., Gordillo, M.E., Ubios, A.M “Bone response to different strenght orthodontic forces in animals with periodontitis”. Journal of Periodontal Research. Vol 40. issue 6. (pág 441-445). Diciembre 2005 • Lewintre de Borjas, M y Collantes, Carmen. “Distalamiento de caninos: Reacción de los tejidos peridentarios a las distintas fuerzas ortodóncicas con distintos elementos”. Revista de la Facultad de Odontología. UNNE. Nº1. (18-22). 1993.