1 / 21

تفاعل البلمره التسلسلي Polymerase Chain Reaction (PCR)

تفاعل البلمره التسلسلي Polymerase Chain Reaction (PCR). إعـــداد:- رنــا التركي وحدة الأبحاث الوراثية المختبر المركزي برنامج موهبة الصيفي في جامعة الملك سعود2010م. 1- تعريف تفاعل البلمره التسلسلي ( (PCR . 2- اكتشافه. 3- استعمالاته. 4- مميزاته. 5- مطلبات تقنيه ( (PCR .

chace
Download Presentation

تفاعل البلمره التسلسلي Polymerase Chain Reaction (PCR)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. تفاعل البلمره التسلسليPolymerase Chain Reaction (PCR) إعـــداد:- رنــا التركي وحدة الأبحاث الوراثية المختبر المركزي برنامج موهبة الصيفي في جامعة الملك سعود2010م

  2. 1- تعريف تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR. 2- اكتشافه. 3- استعمالاته. 4- مميزاته. 5- مطلبات تقنيه ((PCR. 6- مبدأ التفاعل. 7- مراحل التفاعل أوسير عملية التفاعل. 8 – طريقه العمل. تفاعل البلمره التسلسليPolymerase Chain Reaction (PCR)

  3. هو تقنية مخبريه تقوم على عمل نسخ عديدة من الحمض النووي (DNA )  خارج النظام الحيوي ( أي أنها طريقة لنسخ الحمض النووي في المختبر) لذلك فهي تقنية حيوية  لاستنساخ قطعة من محددة من الحمض النوويDNA و  مضاعفة إنتاجه  لكي يتسنى إجراء عليه اختبارات و أبحاث وفحوصات إضافية. تعريف تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR

  4. اكتشاف تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR • هي تقنية مخبريه تم اكتشافها عام 1983م  تقريباً من قبل العالم • العالم د. كري مولس ( Dr. Kerry Mullis ). • تمكن العالم د. كري مولس  Dr. Kerry Mullis •  في عام 1985م من نشرتقنية   PCR فكانت هذه التقنية • بوابة لكثير من التطورات المتسارعة في مجال • التكنولوجيا الحيوية. • حصل على جائزة نوبل في الكيمياء عام 1993م .

  5. استعمالات تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR • ناتج التفاعل يفيد لكثير من التجارب و الأبحاث :- • تشخيص الأمراض الوراثيه. • الاستنساخ. • الأبحاث الجنائيه . • اكتشاف الأمراض البكتيريه والفيروسيه. • معرفة تسلسل القواعد النيتروجينية. • الطفرات . • تحديد الهوية الوراثية و إثبات الأبوه.

  6. مميزات تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR • يعطي نتائج سريعه في وقت قليل. • يتم تحطيم جزء معين من الحمض النووي DNA. • يستهلك كميات صغيرة. • الجهاز يقوم بكافه المراحل وطباعه النتائج وحفظها.

  7. متطلبات تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR 1- عينة التفاعل(DNA Sample ).

  8. متطلبات تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR CCGAATGGGATGC GGCTTACCCTACG 2- البادئات (Primers):- • نوعان : • أمامي (Forward). • خلفي ( Reverse). • وهي تسلسل من القواعد النيتروجينيه في شريط واحد قصير(20-25 bp) مكمل لبداية الجزء المراد تضخيمه في الحمض النووي.

  9. متطلبات تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR 3-انزيم التفاعل (( Hot Star Taq polymeraseأو(-:( Taq polymerase • مستخرج من سلالة بكتيريه تسمى Thermus aquaticus التي تعيش في مياه حارة. • لايتأثر في درجات الحرارة المرتفعه. • درجه الحراة المثلى له 72º م.

  10. متطلبات تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR 4- القواعد النيتروجينية ( Nitrogen Base dNTPs):- • أدنين Adenine • ثايمينThymine • جوانينGuanine • سايتوسينCytosine

  11. متطلبات تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR 5- محلول منظم ( PCR Buffer10x). 6- ماء مقطر (Distilled Water).

  12. متطلبات تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR 7-جهاز تفاعل البلمرة التسلسلي(-:(Thermocycler يقوم هذا الجهاز بتغير درجة الحرارة بشكل سريع و دقيق و متتالي  لأن تغير درجة الحرارة مهم في عمليه التضاعف.

  13. مبدأ تفاعل البلمره التسلسلي ((PCR دوره متعاقبه لتفاعل يعتمدعلىإرتفاع درجة الحرارة وانخفاضها لنسخ جزء معين من الحمض النووي وتضخيم هذا الجزء عدديا.

  14. مراحل التفاعل أو سير العمل ((PCR هناك ثلاث خطوات مهمه والتي يقوم الجهاز بإعادتها تلقائيا بعد برمجته وهي: 1- مرحله التفكيك (denaturation): فصل شريطي الحمض النووي عن بعضهما عند (95 ̊م).

  15. مراحل التفاعل أو سير العمل ((PCR 2- مرحله الالتصاق(anealing): إنزال الحرارة إلى ما بين 40-60 ْم ليقوم البادئ(primer) بالالتصاق بواسطة الروابط الهيدروجينية مع الحمض النووي (DNA ) عند (40 - 60 ̊ م).

  16. مراحل التفاعل أو سير العمل ((PCR 3- مرحله الامتداد :(extension)رفع درجة الحرارة مرة أخرى ليقوم الأنزيم بعمله في بناء الحمض النووي (DNA )  الجديد عند (27̊ م ). الامتداد Extension

  17. مراحل التفاعل أو سير العمل ((PCR

  18. طريقه عمل ((PCR

  19. طريقه عمل ((PCR • نضيف 23 مايكروليتر من المزيج الرئيسي على كل أنبوب من أنابيب PCR ثم نضيف 2 مايكروليتر من عينه الدنا (DNA) . • نضع جميع الأنابيب في جهاز الطرد المركزي 3000 دورة في الدقيقه لمدة دقيقه واحدة لخلط جميع العينات وإزاله جميع الفقاعات.

  20. نظــام التفاعل ((PCR

  21. شكراً لحسن استماعكم

More Related