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Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin

Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin. POURQUOI ? Obtenir la formule antigénique qui désigne le SÉROVAR, seul moyen de préciser l’identification d’une Salmonella. QUE RECHERCHE T’ON ? Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches mobiles Ag Vi de la micro-capsule.

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Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin

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Presentation Transcript

  1. Sérogroupage des Salmonellapar Christiane Joffin

  2. POURQUOI ? • Obtenir la formule antigénique qui désigne le SÉROVAR, seul moyen de préciser l’identification d’une Salmonella

  3. QUE RECHERCHE T’ON ? • Ag O de paroi • Ag H du flagelle pour les souches mobiles • Ag Vi de la micro-capsule

  4. 1- Les antigènes des Salmonella

  5. Voir dicitonnaire p 299

  6. 2- Le principe du sérogroupage des Salmonella

  7. COMMENT ? • Après l’identification biochimique du genre Salmonella, on réalise à partir d’une culture PURE sur milieu non sélectif (GO, MH, Kligler) :une identification des Ag O, H (et Vi) de la bactérie • en utilisant des Ac connus • par une technique d’agglutinationdirecte sur lame.

  8. Procédure du sérogroupage Identifier : • d’abord les Ag O de paroi, • puis les Ag H de flagelle • et éventuellement l’Ag Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de l’Ag Vi. Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation d’un réseau volumineux visible sous forme d’un agglutinat.

  9. Agglutination des Salmonella par suite réaction Ag O/ Ac anti O Agglutination des Salmonella par suite d’une réaction Ag H / Ac anti H

  10. 3- Les réactifs pour le sérogroupage des Salmonella Voir dictionnaire p 296

  11. Origine des Ac : Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum • COÛT : • 30 € les 3 mL • 10 € par mL • 10 000 € par L !!!!!!!!!!!!!!!! Soit 0,300 Kg d’OR.

  12. 3-1- Les Ac anti Ag O • Des sérums O mélange Sérums (contenant un grand nombre d’Ac différents) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG) • Des sérums O monovalents Sérums ne contenant qu’un seul type d’Ac : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24.

  13. Les Ac anti Ag O monovalents • Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMA ? • Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ? Ac anti 0 1, 2 pour le groupe A Ac anti 0 4, 5 pour le groupe B Ac anti 0 9 pour le groupe D Ac anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti 0 6 7 8

  14. 3-2- Les Ac anti Ag H • Des sérums H mélange • Sérum contenant un mélange d’Ac anti Ag H • Des sérums H monovalents • Sérum ne contenant qu’un seul type d’Ac

  15. 3-3- Les Ac anti Vi • Il n’existe d’un Ag Vi (microcapsule de • S. Typhi • S. PARATYPHI C • S. Dublin) 18

  16. 4- La technique du sérogroupage Voir p 296

  17. 4-1- Les étapes du sérogroupage Premières étapes 1- S’assurer que la bactérie est bien une Salmonella 2- Vérifier que la souche n’est pas auto-agglutinable (réalisation d’un témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence d’eau physiologique)

  18. Les étapes du sérogroupage (suite) Étapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O 3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges d’Ac anti-O • OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1, 2, 3, 4, 5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46) • OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7, 8, 11, 13, 14, 20, 22, 23, 24) Remarque : si pas d’agglutination avec OMA et OMB, il faudra rechercher si la souche possède l’Ag Vi en utilisant des AC anti Vi 4- Préciser l’identification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe.

  19. Les étapes du sérogroupage (suite) Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H . 5- Identifier les Ag H parmi ceux possibles (en fonction du résultat de l’identification de l’Ag O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter l’ordre des fréquences de groupe. ATTENTION : nous ne disposons pas au laboratoire de tous les sérums nécessaires… Il faut donc faire au mieux !

  20. 5 6 3 4 7 1 2 Anti O4, 5 Anti O 9 Anti H g, m Anti H l, v Sérum f OMA Anti H 1, 5 4-2- Exemple de résultats d’un sérogroupage La bactérie n’appartient pas au groupe B Pas d’agglutination avec l’eau physiologique : Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés Agglutination avec OMA : les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L Agglutination avec Anti O9 : les Salmonella appartiennent au groupe D Agglutination avec Anti H1 et H5 les Salmonella sont Salmonella Panama

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