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E.A.P: Microbiologia y Parasitologia

E.A.P: Microbiologia y Parasitologia. I nfluencia del pH y la temperatura en la producción de biomasa y esporas de Beauveria sp PR–11 aislada del departamento de A yacucho. Integrantes. Mallqui Crispin, Yesenia Cañari Limaymanta, Denis Elvis Rivas Ayala, Lizeth

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E.A.P: Microbiologia y Parasitologia

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Presentation Transcript

  1. E.A.P: Microbiologia y Parasitologia Influenciadel pH y la temperatura en la producción de biomasa y esporas deBeauveriasp PR–11 aislada del departamento de Ayacucho

  2. Integrantes • Mallqui Crispin, Yesenia • Cañari Limaymanta, Denis Elvis • Rivas Ayala, Lizeth E-mail: Canari_03@hotmail.com Asesor: • Ph.D.Castellanos Sánchez, Pedro Luis E-mail: pcastellanoss@unmsm.edu.pe

  3. Los hongos entomopatógenos han jugado un papel importante en la historia del control microbiológico yha sido utilizado exitosamente para controlar plagas de muchas regiones del mundo. • Su factibilidad de reproducción en forma controlada y la rentabilidad de su uso, representa una alternativa viable de estos hongos al ser utilizados sin perjuicios al ambiente y sin efectostóxicos. Introducción

  4. La cepa PR-11 del Género Beauveria aislada de Schistocerca piceifroms peruviana (Lynch Arribalzaga, 1903), nativo del departamento de Ayacucho, fue aislada y seleccionada para el control de plagas y vectores en nuestro laboratorio. Introducción

  5. Para el uso de un hongo entomopatógeno como bioinsecticida, debe producirse en condiciones controladas esporas a concentraciones altas. • Para lo cual es importante conocer los parametros fermentativos de producción óptimos: • pH • formación de micelio y esporas • Temperatura • agitación • humedad

  6. Determinar la temperaturaóptimapara la producción de biomasa y esporas. • Evaluardiferentesniveles de pH óptimospara la mayor producción de biomasa y formación de esporas de Beauveria sp PR-11. • Determinarla dinámica de producción en el tiempo de la biomasa y esporas. OBJETIVOS

  7. Se emplearón dos métodos fermentativos: • En estado sólido para la producción de esporas. • En estado líquido en condiciones estáticas para la producción de biomasa. • Se determinó el número de esporas y la producción de biomasa a los 5, 10, 15 y 21 días de incubación, con tres repeticiones cada uno. Metodologia

  8. Las esporas del hongo se utilizaroncomoinóculo en frascos con medio agar papa glucosa (APD) en planoinclinado y se incubaronhastapor 21 días a temperatura del laboratorio. • Luegolasesporasfuerondispersadas en unasoluciónacuosa con Tween al 1% parasu posterior inoculación. Metodologia

  9. Se utilizómedioCzapeck con glucosacomoúnicafuente de carbono, a niveles de pH de: 4.0, 4.3, 4.4, 4.6, 5.0 y 5.6, con tresrepeticionescadauno. 1 mL del inóculomadre de esporasse adicionó a cadajuegode frascoserlenmeyerparacadanivel de pH . Se sembróporestriado en los viales con agar Czapeck a diferentes pHs y se incuba a 21 días a temperaturade laboratorio => Fermentaciónen sustratosólido. Evaluación del ph

  10. El hongofuesometido a estudios de fermentaciónsumergidadurante 21 días en agitador orbital Gemmy VRN-480 a 180 rpm, en medioCzapeck. => Para favorecer el aumento de la biomasa.

  11. Se inóculo 200 uL de la solución acuosa con tween conteniendo los conidios en el medio czapeck con glucosa como única fuente de carbono a pH 4,4. • Se evaluó la producción de esporas en 20, 27 y 30 ºC, con 3 repeticiones. Evaluación de la temperatura

  12. Se utilizó 0.1 mL de inóculo inicial en frascos erlenmeyer con medio czapeck a pH 4,5. • Se evaluaron las siguientes temperaturas: • 20, 27 y 30 ºC, con 3 repeticiones por cada una, y se determinó la produccióna los 5, 10, 15 y 21 días en condiciones estáticas.

  13. La producción de esporas en el experimento se calculó mediante conteo en la cámara de Neubauer, usando una solución acuosa de Tween al 1%, para dispersar las esporas. Esto se repetió cada 5 días durante los 21 días de incubación. DETERMINACIÓN DEL Nº DE ESPORAS

  14. pH = 4,00 a 1 14 13 21 7 12 13,4 2 10 8 9 18 10 11,0 3 25 10 22 9 10 15,2 4 8 12 11 28 8 13,4 5 9 16 8 10 9 10,4 12,7 Cálculode Esporas

  15. Se separó la biomasa del cultivo líquido en papel filtro pesado previamente. • Se eliminó la humedad del papel filtro a 50ºC por 24 horas. • Por diferencia de peso se obtuvo la biomasa de cada frasco, y luego se halló el promedio de la biomasa de cada nivel de temperatura y pH. Determinación del peso seco

  16. RESULTADOS - pH

  17. RESULTADOS - pH

  18. RESULTADOS

  19. Resultados a diferentes temperaturas

  20. Resultados - Esporas

  21. Resultados - Biomasa

  22. Resultados - Biomasa

  23. Se observóque: - A pH 4.5 se da la mayor producción de biomasa con 49 mg / mL. - A pH 4.4 se obtuvo la mayor producción de esporas con 56.4 x 107esporas / mL. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

  24. Se observó que a 20º C se obtuvo: • La mayor concentración de la biomasa con 74 mg. • La mejor producción de esporas con una concentración de 11.4 x 108 esporas / mL. Discusión de resultados

  25. Resultados - Esporas Resultados - Biomasa

  26. La mejor producción de biomasa se produjo a los 15 días del cultivo, mientras que la mayor producción de esporas se obtuvo a los 21días.

  27. Se determinó que para producción de biomasa y esporas en Beauveria sp PR 11 la temperatura óptima fue de 20 ºC. Sin embargo, tuvierón diferentes dias óptimos de formación. Conclusiones

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