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Aguilar Rosete Lucero Escandon Barragan Edith Espinoza Lopez Victor Hugo

PRINCIPIOS DE TÉCNICAS USADAS EN BIOLOGÍA MOLECULAR. Aguilar Rosete Lucero Escandon Barragan Edith Espinoza Lopez Victor Hugo Hernandez Tapia Brenda Raquel Mendez Salazar Michelle. ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA PARA SEPARAR ADN DE DISTINTOS TAMAÑOS. ELECTROFORESIS.

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Aguilar Rosete Lucero Escandon Barragan Edith Espinoza Lopez Victor Hugo

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Presentation Transcript

  1. PRINCIPIOS DE TÉCNICAS USADAS EN BIOLOGÍA MOLECULAR Aguilar Rosete Lucero EscandonBarragan Edith Espinoza LopezVictor Hugo Hernandez Tapia Brenda Raquel Mendez Salazar Michelle

  2. ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA PARA SEPARAR ADN DE DISTINTOS TAMAÑOS.

  3. ELECTROFORESIS Técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre).

  4. AGAROSA La agarosa es un polisacárido formado por galactosas alfa y beta que se extrae de las algas de los géneros Gellidium y Gracillaria. Su uso más extendido es para construir geles que permitan separar moléculas de ADN mediante electroforesis, además de ser utilizada para fijar moléculas a su estructura como anticuerpos, antígenos y enzimas. Igualmente se utiliza para el cultivo celular y microbiología. Otros usos menos extendidos son la utilización de estos geles como matrices en la reparación de tejidos dañados.

  5. ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA. Es la mezcla de moléculas aplicada ha un campo eléctrico, estas se moverán y deberán ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas), por lo que las pequeñas se moverán mejor y más rápidamente. Así, las más pequeñas avanzarán más y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida.

  6. ¿EN QUÉ SE BASA ESTA TÉCNICA? Es la migración de las moléculas con carga neta de una muestra, cuando es sometida a un campo eléctrico, hacia el polo opuesto de su carga Las muestras se aplican en pocillos practicados dentro de un gel. Una de las formas mas comunes de fragmentar el DNA es el empleo de endonucleasas de restricción que cortan la secuencia diana característica.

  7. La carga eléctrica de una molécula de DNA depende de sus grupos fosfatos y el numero de estos es igual al doble de numero de PB. La forma de todas las moléculas de DNA es esencialmente la misma. La electroforesis separa los fragmentos de DNA de acuerdo con su longitud de PB. De forma similar al caso de proteínas SDS-PAGE se suelen aplicar patrones en unos de los pocillos para hacer una curva de calibrado de tamaños.

  8. ¿CÓMO SE HACE?

  9. ¿Por qué se usan los marcadores de tamaño molecular? • Polisacárido • Geles fáciles de preparar • No es tóxico • Amplio rango de separación • Baja resolución • Usado típicamente para ADN

  10. Visualización de bandas (Ej.: por luz UV)

  11. PELIGROS ¿POR QUÉ EN BROMURO DE ETIDIO? Marcaje de los ácidos nucleícos. Agente intercalante  Se intensifica unas 20 veces  sustancia fuertemente mutagénica

  12. Fragmentos de hasta 20 kpb PATRON DE BANDAS

  13. ¿Qué es un fago lambda? Bacteriófago=virus

  14. La infección es realizada en dos etapas: La inyección La adsorción

  15. ADN lineal y los extremos cos ADN se circulariza

  16. FAGO LÍTICO

  17. FAGO LISOGÉNICO

  18. La enzima de restricción EcoRI reconoce y se une a la secuencia palindrómica GAATTC. El corte del DNA en este sitio produce colas de cadena sencilla complementarias. La colas de cadena sencilla resultantes pueden unirse con colas complementarias de otros fragmentos de DNA para formar moléculas de DNA recombinante.

  19. Fago lamda dirigiendo su ADN con la enzima Bamh 1 y Ecor1

  20. MODIFICACION DE BACTERIAS POR LA INTRODUCCION DE GENES EXOGENOS

  21. ¿PARA QUE SE USAN ESTAS TECNICAS?

  22. ALGUNAS FORMAS DE ALTERAR GENES RADIACIONES PRODUCTOS QUIMICOS CRUZA DE ESPECIES MUY PARECIDAS PERO NO IDENTICAS

  23. RECOMBINACION IN VITRO

  24. BIOBALISTCA El ADN se introduce en protoplastos por bombardeo con biomicroproyectiles.

  25. Electroporacion  Es una técnica que crea o que dota a la membrana de cierta permeabilidad al DNA durante unos pocos segundos debido a una descarga eléctrica.

  26. TECNICA DEL CHOQUE TERMICO PROTEINAS HSP:son un conjunto de proteínas que producen las células tanto de organismos unicelulares como pluricelulares, cuando se encuentran en un medio ambiente que le provoca cualquier tipo de estrés.

  27. Referencias bibliograficas Herramientas y técnicas para el estudio del adn (http://www.medicina.org.ar/bioquimica - clínica/407 - herramientas - y - técnicas - para - el - estudio - del - adn.html)  http://www.bioted.es/medio_electroforesis.htm Luque, J. y Herraez, A. (2001) Texto Ilustrado de biología molecular e ingeniería genética , conceptos, técnicas y aplicaciones en ciencias de la salud. Harcourt. Mathews, C.K y Van Holde, K.E (1998) Bioquímica 2ªed. Mc Graw-Hill Interamericana. Freifelder, D. (1991) Técnicas de bioquímica y Biología molecular. Reverte.

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