300 likes | 1.03k Views
15. VAJA:. OGLJIKOVI HIDRATI. OGLJIKOVI HIDRATI. So najpogostejša oblika bioloških makromolekul. Sestavljajo jih trije elementi: C, H, O. Splošna formula: (C · H 2 O) n , n ≥ 3. Nastajajo pri fotosintezi in glukoneogenezi, njihova oksidativna razgradnja zagotavlja E za biološke procese.
E N D
15. VAJA: OGLJIKOVI HIDRATI
OGLJIKOVI HIDRATI • So najpogostejša oblika bioloških makromolekul. • Sestavljajo jih trije elementi: C, H, O. • Splošna formula:(C·H2O)n, n ≥ 3. • Nastajajo pri fotosintezi in glukoneogenezi, njihova oksidativna razgradnja zagotavlja E za biološke procese.
OGLJIKOVI HIDRATI • Sodelujejo v energijskem metabolizmu: - nekateri se lahko neposredno uporabijo kot metabolno gorivo (glukoza, fruktoza); - nekateri so rezervne spojine (glikogen, škrob).
OGLJIKOVI HIDRATI • So strukturni elementi celične stene rastlin, bakterijskih celičnih sten, kože in vezivnega tkivaterzunanjega oklepa pri členonožcih.
OGLJIKOVI HIDRATI • Kovalentno povezani s proteini in kompleksnimi lipidi delujejo kot označevalci na površini celic pri prepoznavanju drugih molekul.
Ekstracelularni matriks: • Glikozaminoglikani • Glikoproteini in Proteoglikani • GAG (glikozaminoglikani): • Dermatan sulfat • Hondroitin sulfat • Keratan sulfat • Heparan sulfat • Glikoproteini: • Kolagen • Fibronektin • Laminin Proteoglikani (proteini + glikozaminoglikani):
OGLJIKOVI HIDRATI • Monosaharida riboza in deoksiriboza sta komponenti nukleinskih kislin: - zgradba RNA, DNA; - ribocimi (katalitični procesi).
MONOSAHARIDI • So aldehidni ali ketonski derivati polihidroksi alkoholov z ravnimi verigami, ki vsebujejo najmanj 3 C atome. • Poimenovanje glede na: • kemijsko naravo karbonilne skupine (aldoza, ketoza); • glede na število C atomov (trioze, tetroze, pentoze, heksoze, heptoze,…)
MONOSAHARIDI Različne stereoizomerne oblike: • Enantiomere: Zrcalno simetrični izomeri (optični izomeri), ki sučeta ravnino linearno polarizirane svetlobe za enak kot, le v nasprotno smer.
MONOSAHARIDI Različne stereoizomerne oblike: • D in L oblike: Ločimo glede na položaj OH skupine na zadnjem asimetričnem C atomu, če sladkor napišemo vFischerjevi projekciji.
MONOSAHARIDI Različne stereoizomerne oblike: • Epimere: Sladkorji, ki se razlikujejo le v konfiguraciji okrog enega C atoma.
MONOSAHARIDI • V vodni raztopini se monosaharidi nahajajo predvsem v ciklični obliki, ki jo opišemo zHaworthovo projekcijo. • Pri ciklizaciji nastane na C1 nov asimetrični ogljikov atom, ki ga imenujemo anomerni C atom. • Anomere: Sladkorja, ki se razlikujeta po položaju OH skupine na anomernem C atomu.
SAHARIDI • Glikozidna OH skupina: • OH skupina, ki je nastala iz aldehidnega ali ketonskega kisika na C1 (anomeren C); • je reaktivnejša od ostalih OH skupin in rada tvoriglikozidno vezz drugo OH skupino; • lahko nahaja v položaju ali ; • prostaglikozidna OH skupina daje sladkorjem lastnostireducentov.
POLISAHARIDI • Sestavljeni so iz monosaharidov, ki so med seboj povezani z glikozidnimi (eterskimi) vezmi. • Sladkorje, ki so sestavljeni le iz nekaj monosaharidnih enot (3-10) imenujemooligosaharide. • Lahko tvorijo linearne ali razvejane polimere. • Lahko so reducirajoči. • Homopolisaharidi: • škrob • celuloza • glikogen • Heteropolisaharidi: • glikozaminoglikani • proteoglikani • peptidoglikani Škrob (1α-4 vez) Celuloza (1β-4 vez)
Določanje reducirajočih sladkorjev: • Reducirajoči sladkorji imajo CHO skupino (aldoze), ki se oksidira v COOH (oz. v COO-). Da se to zgodi, mora biti obroč odprt – hemiacetali! • Tudi ketoze so lahko reducirajoče, saj lahko s tavtomerizacijo preidejo v aldoze preko enediol intermediata. • Metode za določanje reducirajočih sladkorjev: • kemijske metode: redukcija kovinskega iona (Cu2+, Fe3+, Ag+) s sladkorjem • encimske metode: encimska pretvorba specifičnega sladkorja v produkt
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • Molischeva reakcija Princip: konc.H2SO4hidrolizira glikozidne vezi - pentoze preidejo vfurfural - heksoze preidejo vlevulinsko kislino ZMolishevim reagentomse ti produkti obarvajo škrlatno. • Anthronska reakcija Furfural, ki nastane po reakciji sH2SO4daje zanthronskim reagentommodro-zeleno obarvan kompleks.
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • Nastanek srebrovega ogledala reducirajoči sladkorji v alkalni raztopiniAgNO3reducirajo Ag+ v elementarno obliko (Ag°), ki se izloči na stene epruvete – zrcalo! • Fehlingova reakcija temelji na redukcijiCu2+, pri čemer nastane v alkalni raztopini bakrov (I) oksid.
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • Benedictova reakcija je modifikacija Fehlingove reakcije • Inverzija saharoze Saharoza je nereducirajoč disaharid iz -D-glukoze in -D-fruktoze. Določimo jo lahko tako, da jo hidroliziramo do monosaharidov in določimo le-te.
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • MOLISHEVA REAKCIJA Z -NAFTOLOM • 2 mL vzorca dodaj 2 kapljici Molishevega reagenta. • Ob robu epruvete prilij 1 mL žveplove kisline, da nastane škrlaten obroč! • ANTRONSKA REAKCIJA • 2 mL antronskega reagenta dodaj 5 kapljic vzorca, zmešaj in opazuj spremembo barve!
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • NASTANEK SREBROVEGA OGLEDALA • Delaj v digestoriju! • 0,5 mL srebrovega nitrata dodaj 1 mL amoniaka in 1 mL vzorca. • Previdno segrevaj nad plamenom do nastanka srebrovega ogledala. (EPRUVETO OBRNI PROČ OD SEBE!!!) • BENEDICTOVA REAKCIJA • 1 mL Benedictovega reagenta dodamo 5 kapljic vzorca. • Segrevamo 5 min na 100 oC (vrela vodna kopel). Opazuj spremembo barve!
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • FEHLINGOVA REAKCIJA • 1 mL reagenta Fehling I dodamo 1 mL reagenta Fehling II in segrevamo. • K 0,5 mL vzorca v drugi epruveti prilijemo mešanico segretih reagentov. • Segrevamo, dokler ne izpade oborina bakrovega oksida (= rdeča usedlina)!
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • INVERZIJA SAHAROZE • Hidroliza saharoze • 5 mL raztopine saharoze dodaj 5 kapljic konc. HCl in segrevaj 10 min v vreli vodni kopeli. • Ohladi in dodaj 5 kapljic NaOH. b) Dokazovanje reducirajočih sladkorjev z Benedictovo reakcijo Kot vzorec uporabi: - saharozo - hidrolizirano saharozo
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • DOLOČANJE POLISAHARIDOV • Hidroliza škroba • 5 mL raztopine škroba dodaj 5 kapljic konc. HCl in segrevaj v vreli vodni kopeli 10 min. • Na začetku, po 5 min in po 10 min odvzemi kapljico vzorca in jo na steklu zmešaj s kapljico jodovice. Opazuj spremembo barve! • Ohladi in dodaj 1 mL NaOH. • Dokazovanje reducirajočih sladkorjev z Benedictovo reakcijo Kot vzorec uporabi: - raztopino škroba - hidroliziran škrob
KVALITATIVNO DOLOČANJE OGLJIKOVIH HIDRATOV • DOLOČANJE NEZNANIH VZORCEV (reducirajoči ali nereducirajoči sladkorji) • Vsaka skupina dobi 2 vzorca. • Z Benedictovo reakcijo določi ali je sladkor reducirajoč ali nereducirajoč.