1 / 81

Biyoteknolojide Kullanılan Yöntemler

Biyoteknolojide Kullanılan Yöntemler. Protein Saflaştırmada Yapılan İşlemler. Hücrelerin Parçalanması. T ekrarlı dondurma ve eritme ( Örn : Sıvı azot) Sonikasyon (Ultrason), Mekanik Parçalama (Blender) Organik çözücülerle hücre zarının geçirgenleştirilmesi Deterjanlarla muamele.

ferris-wheeler
Download Presentation

Biyoteknolojide Kullanılan Yöntemler

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Biyoteknolojide Kullanılan Yöntemler

  2. Protein Saflaştırmada Yapılan İşlemler

  3. Hücrelerin Parçalanması • Tekrarlı dondurma ve eritme (Örn: Sıvı azot) • Sonikasyon (Ultrason), • Mekanik Parçalama (Blender) • Organik çözücülerle hücre zarının geçirgenleştirilmesi • Deterjanlarla muamele

  4. Ultrasonla Parçalama Ultrason ile zayıflamak mümkün mü?

  5. Mekaniksel Parçalama

  6. Çöktürme ile kısmi saflaştırma • Amonyum sülfat çöktürmesi • İzoelektrik çöktürme • Organik çözücülerle çöktürme • Asit ile çöktürme • Isı yoluyla çöktürme • Triton X-100 veya CHAPS ile membran proteinleri sökülebilir. SDS proteinleri denatüre ettiği için bu amaç için kullanılmaz.

  7. Santifüj • Santrifüj ile karışımda asılı kalan maddelerin daha hızlı çökmesi salanır. • Ultra santrifüj kullanılarak mitekondriler bile çöktürülebilir.

  8. Diferansiyel santrifüjleme. Homojenat, gittikçe artan santrifüj kuvvetine maruz bırakılarak fraksiyonlara ayrılır.

  9. Denge yoğunluk gradient santrifüj yöntemi

  10. Diyaliz • Protein saflaştırmasının çeşitli aşamalarında proteinlerin küçük moleküllerden ayrıştırılması için kullanılan bir işlemdir. Örneğin, amonyum sülfat ile çökeltmenin ardından kullanılacak bir iyon değişim kromatografisi (bkz. aşağıdaki bilgili bölüm) adımı için bu tuzun giderilmesi gerekir, bunun için diyaliz yapılır.

  11. Diyaliz • Diyalizde, yarı geçirgen bir membran kullanılır, porlu bir selüloz membran gibi. Porların büyüklüğü proteinlerin geçmesine izin vermez ama küçük moleküller ve tuz iyonları geçebilir.

  12. Diyaliz • Diyaliz edilecek protein karışımı bir dializ torbasına konur, torba da büyük hacimli bir tampon çözeltisi içine yerleştirilir. Birkaç saat sonra torbanın dışındaki ve içindeki çözelti dengelenir, iki taraf küçük moleküller bakımından aynı bileşime sahip olur.

  13. Diyaliz İşlemi ile tuzların uzaklaştırılması

  14. Diyaliz sistem dengeye ulaşıncaya kadar devam eder

  15. Jel filtrasyonkromatografisi ile de tuzlar uzaklaştırılabilir

  16. Kromatografik Yöntemler • Protein Saflaştırılmasında genellikle kolon kromatografisi kullanılır. Bunlar: • Afinitekromatografisi • İyon değişim kromatografisi • Jel filtrasyonkromatografisi

  17. Kromatografi, bir karışımdaki maddelerin bir sabit faz üzerinde farklı hızlarda sürüklenmesi sonucunda birbirinden ayrılması temeline dayanır. • Maddeleri sürükleyen ise bir sıvı ya da gaz olabilir

  18. Karışımdaki maddeler sabit faz tarafından ne kadar alıkonuyorsa o oranda yavaş ilerler. • Örneğin; sıkışık bir trafikte taksiler durmuş iken motosikletlerin daha hızlı ilerlemesi gibi… • Ya da trafik kontrolünde taşıtlar durdurulurken yayaların ilerlemesi gibi…

  19. Uygulama Şekline Göre • İnce Tabaka Kromatografisi • Kolon Kromatografisi Sabit faz, saflaştırılmak istenen maddenin cinsine göre değişir. Bu sabit fazı genellikle hem ince tabaka hem de kolon kromatografisine uygulayabiliriz. Tercih size kalmış.

  20. İnce Tabaka Kromatografisi

  21. Sabit Faz Başlangıç Hareketli Faz

  22. s o l v e n t f r o n t o r i g i n s o l v e n t f r o n t Less polar! c o m p o n e n t B s o l v e n t f r o n t c o m p o n e n t B More polar! c o m p o n e n t A c o m p o n e n t A mixture o r i g i n o r i g i n

  23. Rf değeri aynı şartlarda bir madde için aynıdır. • Rf ayırt edici bir özelliktir.

  24. Elinizdeki karışımda, şüphelendiğiniz maddenin olup olmadığını İTK ile anlayabilirsiniz. Ayrılan noktayı kazıyıp maddeyi saf olarak da elde edebilirsiniz.

  25. Kolon Kromatografisi

  26. Principles of Separation on a column

  27. Principles of Separation

  28. Principles of Separation

  29. Principles of Separation

  30. Principles of Separation

  31. Principles of Separation

  32. Principles of Separation

  33. Kolon kromatografisi uygulanan tekniğe göre değişik alt bölümlere ayrılabilir. • İyon değişim kolonu • Jel filtrasyon kolonu • Afinite kolonu • Hidrofobik etkileşme kolonu

  34. İyon Değişim Kromatografisi Kolondaki sabit faz çalışılan pH’da + ya da – bir yüke sahiptir. Sabit fazla zıt yükle yüklü olan maddeler kolonda alıkonurken aynı yükte olanlar alıkonmazlar.

  35. Jel FiltrasyonKromatografisi ŞOK! ŞOK! ŞOK! Daha büyük moleküller daha hızlı ilerler.

  36. Afinite Kroma.. Specific interactions

  37. AfiniteKromatografisi Sabit faza öyle bir molekül tutturulur ki; sadece ilgilendiğimiz molekülle etkileşir ve onu kolonda tutar.

  38. Afinitekromatografisinde gerekirse uzatma kolu kullanılabilir

  39. Kromatografi bir çok analiz cihazının kullandığı saflaştırma tekniğidir. Bunlardan sıklıkla kullanılan ikisi: • HPLC • Gaz Kromatografisi

  40. Çözücüler Pompa Enjektör Kolon Dedektör HPLC Hewlett-PackardSeries 1100 HPLC

  41. HPLC

  42. HPLC ŞEMA

  43. HPLC HPLC Chromatogram of Standard 1 0.500 x 10-4 M caffeine

  44. HPLC HPLC Chromatogram of Standard 2 1.00 x 10-4 M caffeine

  45. HPLC

  46. Gaz Kromatografisi

More Related