PRELEVEMENTS DE CELLULES SOUCHES Docteur Ridha BOUZGARROU

1. PRELEVEMENTS DECELLULES SOUCHESDocteur Ridha BOUZGARROU

2. Prélèvement de moelle osseuse • La moelle est prélevée par aspirations en salle d'opération, en conditions stériles et sous anesthésie générale • L'emplacement de choix est l’épine iliaque postéro supérieure de la hanche • Le volume total de moelle osseuse prélevé est généralement de 800-1500 ml (10-20 ml/kg)

3. LA MOELLE OSSEUSE • Chez l’adulte : • 3000 à 4000 cm3 de moelle osseuse (dont 1500 cm3 de moelle productive “rouge“)

4. Avantages des CSP • Prélèvement sans anesthésie générale • Pas d’hospitalisation • Collecte de grandes quantités de progéniteurs hématopoïétiques

5. Objectifs de la collecte de CSP • Collecter un produit avec : • Une faible contamination par d'autres cellules sanguines (hématies, plaquettes, granulocytes) • Un faible volume de collecte • En un nombre minimal • Assurer la sécurité du patient

6. Le G-CSF ( granulocyte-colony stimulating factor • facteur de croissance granulocytaire • -glycoprotéine de 174 acides aminés • Libéré par les macrophages ,les cellules endothéliales et les fibroblastes • La concentration du G-CSF chez les sujets normaux est extrêmement faible • Mais s’élève chez les sujets ayant une infection ou une aplasie médullaire

7. Le roledu GCFS • Stimule la différenciation,la • prolifération et la maturation de la lignée granulocytaire • Favorise la transformation du CfU-G (Colony forming unit granulocyte) en Polynucléaires neutrophiles • Mobilisation des cellules souches hematopoïetiques dans le sang • périphérique(peripheral blood progenitor cells)

8. Indications • Traitement des neutropénies spontanées ou induites par des chimiothérapies anticancéreuses • Diminue la capacité de défense de l’organisme contre les infections • Mobilisation des cellules souches hematopoietiques dans le sang • périphérique(peripheral blood progenitor cells)

9. Forme Deux protéines obtenues par génie génétique : • Filgrastrime G-CSF NEUPOGEN NEULASTA • LENOGRASTIME GRANOCYTE

10. EFFETS INDESIRABLES • céphalées • douleurs osseuses • douleurs dorsales • douleurs abdominales • élévations des phosphatases alcalines , de l’activité de la lactate déshydrogénase Pourrait augmenter le risque d’apparition d’une hémopathie maligne (aucune preuve à ce jour) .

11. Prélèvement de CSP  Séparateur de cellules CEC  8-10 litres de sang traité  3 à 4 h  séparation des CSP par centrifugation

12. Les machines de l’EFS AMICUS FRESENIUS COBE SPECTRA

13. la séparation Poches de collecte Sang total Pompe plasma Pompe Sang Total Pompe de recirculation Retour Pompe à cellules

14. Amicus CS3000 Spectra Fresenius Corrélation CD34 /µl périphérique – CD34 /µl concentré • Amicus • - 2003 : r = 0,84 ; % récup = 48% • 2004 : r = 0,74 ; % récup = 49% 2003 CD34 concentrés /µl • Fresenius • - 2003 : r = 0,86 ; % récup = 39% • 2004 : r = 0,96 ; % récup = 37% • Spectra • - 2003 : r = 0,85 ; % récup = 34% • 2004 : r = 0,94 ; % récup = 38% 2004 CD34 concentrés /µl CS3000 - 2003 : r = 0,97 ; % récup = 43% CD34 périphériques /µl

15. ASPECTS REGLEMENTAIRES NATIONAUX ET INTERNATIONAUX DU DON DE CSH CELLULES SOUCHES HEMATOPOIETIQUES : • CELLULES SOUCHES ISSUES DE LA MOELLE OSSEUSE • CELLULES SOUCHES PERIPHERIQUES • CELLULES SOUCHES ISSUES DU SANG PLACENTAIRE Il faut également mentionner les cellules mononucléées issues du sang périphérique (lymphocytes)

16. REGLEMENTATION / DON NON APPARENTE • Différentes Réglementations selon les pays (Europe, Amérique du Nord) Absence de réglementation formelle dans certains pays.

17. INFORMATION DU DONNEUR NON APPARENTE • Modalités de prélèvement (BP : 16/12/1998) • - Risques potentiels liés au prélèvement • - Risques anesthésiques (MO) • Conditionnement médicamenteux / CSP (BP) • Anonymat (Loi Bio-éthique) • Caractère bénévole, volontaire (Loi Bio-éthique) • Consentement – cf : TGI(Loi Bio-éthique)

18. APPLICATIONS PRATIQUES/INFORMATION • Document d’information pré-prélèvement (bulletins d’information FGM) • Consentement éclairé écrit obligatoire • Sécurité Donneur/Receveur Vérification de l’aptitude du donneur : - médicale - biologique

19. 2 – PRELEVEMENT DU DONNEURNON APPARENTE (1) • LIMITES D’AGE : • CSP ET CMN  interdits chez mineurs (BP) - 18 – 60 ans (MOELLE) (FGM) - 18 – 50 ans (CSP, CMN)(BP) LIMITE VOLUME : - 20 ml/Kg (MOELLE) - 10 ml /Kg (CYTAPHERESE) (BP) avec volume maximum = 600 ml/Jour

20. 2- PRELEVEMENT DU DONNEURNON APPARENTE (2) • Validation sérologique (Marqueurs) • Rythme et fréquence des prélèvements selon nécessité et tolérance du donneur.  CSP : maximun 2 cessions à 1 jour d’intervalle (FGM etWMDA)

21. 3 – TRANSPORT/TRACABILITE DU GREFFON DE CSP • Durée maximum de CONSERVATION après la fin de prélèvement = 24 heures • TEMPERATURE comprise entre 2° C et 8° C • ETIQUETAGE spécifique du produit : • - Type de produit et code DV • - Lieu et date de prélèvement • - Nom + coordonnées expéd. et destinataire • - Température de transport • - Date de péremption • (et le la boite isotherme)

22. 4 – IMPORT / EXPORT = AFSSAPS •  CELLULES : CSP, CMN, USP MOELLE : loi ORGANE • AUTORISATIONS d’ importation et d’exportation, sur demande des laboratoires de Thérapie Cellulaire concernés  Résultats Marqueurs infectieux à fournir

23. SPECIFICITES DON DE CSPEN FRANCE • - Tous les donneurs non apparentés sont inscrits comme donneurs de MOELLE OSSEUSE - Information donnée sur MO et CSP ( depuis 2000) - Indication CSP posée par médecin greffeur - Comité d’experts / indications cliniques (bénéfices patient / risques donneur) - Consentement final spécifique selon le type de don

24. Effets secondaires observés Questionnaires de suivi pendant 3 ans Incidents survenus (9.5%) • Faible mobilisation = 5 • Mobilisation insuffisante = 1 (prélèvement MO) • Phlébite Mbre Sup et Mbre Inf = 1 • Intensité des douleurs osseuses = 3 • Thrombopénie = 2 (arrêt cytaphérèse)