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Institut des cellules Souches pour le Traitement et l'Etude des maladies Monogéniques

Institut des cellules Souches pour le Traitement et l'Etude des maladies Monogéniques. Comment réparer le cerveaux et ses annexes avec les cellules souches pluripotentes humaines. L’équipe. De l’équipe s’occupant des Rétinopathies. Christelle MONVILLE. De l’équipe s’occupant des Lésion

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Institut des cellules Souches pour le Traitement et l'Etude des maladies Monogéniques

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Presentation Transcript

  1. Institut des cellules Souches pour le Traitement et l'Etude des maladies Monogéniques Comment réparer le cerveaux et ses annexes avec les cellules souches pluripotentes humaines

  2. L’équipe De l’équipe s’occupant des Rétinopathies Christelle MONVILLE De l’équipe s’occupant des Lésion Neurovasculaire Jérôme POLENTES Brigitte ONTENIENTE Marion BRENOT Sébastien DUPRAT

  3. Sommaire 1_ Culture • Pourquoi utiliser des cellules souches ? • Cellules hES et IPS • Mefs hESC, hiPS 1 2_ Différenciation Cellules RPE ( Retinalpigmentedepithelium)  Cellules souches neurales ( NSC ) →Immunohistochimie 2 3_ Les applications • Les greffes • La thérapie cellulaire 3

  4. Pourquoi les cellules souches pluripotentes humaines ? I. Culture des cellules pluripotentes Auto-renouvellement illimité Pluripotence i.e potentiel de différenciation maximum

  5. Quels types de cellules souches pluripotentes humaines ? I. Culture des cellules pluripotentes 5 5 Fécondation in vitro Diagnostic Génétique (D.P.I*) Biopsie, fibroblastes Embryon surnuméraire Reprogrammation Blastocyste Cellules souches pluripotentes induites (iPS) Cellules souches embryonnaires humaines (hES)

  6. I. Culture des cellules pluripotentes Les mef (mouse embryonicfibroblast) Cellules nourricières provenant de la souris Culture de mefs

  7. II. Différenciation Epithélium rétinien dérivé des cellules pluripotentes Cellules embryonnaires humaines Production in vitro de RPE humains Injection In vitro X40

  8. II. Différenciation RPE confluentes RPE décollées comptage Trypsine 5min, 37°C Remise en culture des RPE (500000c/cm2) Immunocytochimie 10j de culture Bleu= noyaux Vert= membrane cellulaire

  9. II. Différenciation Cellules souches neurales dérivées des cellules pluripotentes Ki67Nest ine DAPI TUj1GFAPDAPI Tuj1: Neurones et GFAP: astrocytes Cellule souche neurale

  10. Principe de l'immunofluorescence L'immunofluorescence sert a vérifier le type de cellule présente dans une culture ou une greffe.Il faut préparer des anticorps primaires qui vont venir se fixer sur les cellules spécifiques aux anticorps dans la culture ou sur la coupe de cerveau ayant subi une greffe.L'anticorps secondaire,contrairement au primaire, est fluorescent.Il va se fixer au anticorps primaires. Il faut ensuite rincer la coupe de cerveau ou la culture dans du PBS ( phosphate Buffer Salt ) pour enlever le surplus d'anticorps.Il ne reste plus qu'à observer au microscope. Anticorps Primaires Anticorps secondaires Cellule

  11. III. Applications Les Greffes Coupes de cerveau de rat ayant subi une greffe Colorées au Cresyl Violet Début de la greffe Greffe Fin de la greffe Arrière du cerveau Avant du cerveau

  12. Remerciements Mme Cassini Mme Bonafin Mme Rivière Mr Deroin Mme Henez

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