1 / 64

ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE

ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE. Plan. Ag-At reakcije (opšte osobine) Imunoaglutinacija Imunoprecipitacija Ag-At reakcije sa obeleženim reagensima Ag-At reakcije zavisne od komplementa. Ag-At reakcije su laboratorijske r eakcije između antigena i odgovarajućih specifičnih antitela.

gary-watkins
Download Presentation

ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE

  2. Plan • Ag-At reakcije (opšte osobine) • Imunoaglutinacija • Imunoprecipitacija • Ag-At reakcije sa obeleženim reagensima • Ag-At reakcije zavisne od komplementa

  3. Ag-At reakcije su laboratorijske reakcije između antigena i odgovarajućih specifičnih antitela Ispituje se prisustvo ili antigena (korišćenjem poznatog antitela) ili antitela (korišćenjem poznatog antigena) u uzorku (npr. serumu) Tradicionalno se zovu i serološke reakcije Mogu da budu: Rezultat: 1.Kvalitativne POZITIVAN NEGATIVAN 2.Kvantitativne Ag - KONCENTRACIJA (npr. 2 mg/ml) At - TITAR (npr. 1/80) TITAR je mera količine specifičnih antitela i predstavlja vrednost (recipročnu) najvećeg razblaženja seruma koji daje pozitivnu reakciju

  4. IMUNOAGLUTINACIJA

  5. IMUNOAGLUTINACIJA je reakcija između korpuskularnog (nerastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela Antigen je najčešće na površini ćelije (npr. bakterije) ili je solubilan molekul vezan za inertnu nesolubilnu česticu (nosač) Rezultat reakcije je aglutinat, vidljiva struktura nastala zgomilavanjemtj.aglutinacijom čestica Optimalno stvaranje aglutinata javlja se u zoni ostvarivanja ekvivalentnog odnosa između antitela i antigena

  6. EKVIVALENTAN (OPTIMALAN) ODNOS VIŠAK ANTIGENA VIŠAK ANTITELA Ag-At KOMPLEKSI: AGLUTINACIJA: REZULTAT: MALI NE POSTOJI NEPOUZDAN (LAŽNO NEGATIVAN) FENOMEN PROZONE VELIKI POSTOJI POUZDAN (POZITIVAN) MALI NE POSTOJI NEPOUZDAN (LAŽNO NEGATIVAN)

  7. Detekcija At Primena (Primer) Krajnja identifikacija bakterija (enterobakterije) Detekcija Ag DIREKTNA BAB test (brucele) IMUNOAGLUTINACIJA Detekcija At (Ag vezan za nosač) Lateks RF test (reumatoidni faktor) INDIREKTNA (pasivna) Detekcija Ag (At vezano za nosač) HBsAg test (hepatitis B virus)

  8. IMUNOPRECIPITACIJA

  9. IMUNOPRECIPITACIJA je reakcija između solubilnog(rastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela Antigen je najčešće neki produkt mikroorganizma (npr. toksin) ili protein plazme i drugih telesnih tečnosti (imunoglobulini, komponente komlementa itd.) Rezultat reakcije je precipitat(talog), tj. dolazi do izdvajanja antigen-antitelo komkpleksa u vidu taloga Do formiranja precipitata dolazi u zoni ostvarivanja ekvivalentnog (optimalnog) odnosakoncentracija antitela i antigena

  10. Metodi imunoprecipitacije mogu da se odigravaju u: tečnoj sredini slobodnom difuzijom (talog se formira posle nekoliko minuta) polučvrstoj sredini (gelu) slobodnom difuzijom (talog se formira posle više dana) pomoću električne struje (talog se formira posle nekoliko sati)

  11. PRIMER RING test (Kvalitativna) Askolijeva reakcija (antraks) U TEČNOJ SREDINI određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) Nefelometrija (Kvantitativna) IMUNOPRECIPITACIJA Dvostruka imunodifuzija (Kvalitativna) Elekova proba (difterija) U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU) određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) RID test (Kvantitativna)

  12. Interfacijalni (interfazni) test prstena – RING test (princip)

  13. Nefelometrija (princip)

  14. Dvostruka imunodifuzija u gelu – Elekova proba (princip)

  15. Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test (princip) At u gelu 2 Ag u rupice: 3 1 RID IgG 4 5

  16. Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test (princip) D2 (mm2) 3 2 1 4 5 Ag – koncentracija (g/l)

  17. ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM REAGENSIMA

  18. ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM ANTITELIMA M M - marker At Fc Fab Fab ENZYME-LINKEDIMMUNOSORBENTASSAY (ELISA) - marker ENZIM IMUNOFLUORESCENCIJA (IF) - marker FLUORESCENTNA BOJA RADIOIMMUNOASSAY (RIA) - marker RADIOAKTIVNI IZOTOP

  19. Enzimski imuno-test (ELISA) Koristi se za detekciju antigena u tečnim uzorcima (npr. serumu) ili antitela (tipično u serumu) Marker je enzim, a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo) Bazira se na principu promene boje supstrata pod dejstvom enzima Signal se detektuje kolorimetrijski (pomoću spektrofotometra) Može da bude kvalitativna ili kvantitativna Obavlja se u pločama za mikrotitraciju (pločama sa 96 rupica)

  20. ELISA (ploča sa pozitivnim uzorcima – primer 1)

  21. ELISA (ploča sa pozitivnim uzorcima – primer 2)

  22. Ag ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA) uzorak (serum) neobeležena Ag-specifična At

  23. ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA) 12 6 Ispiranje Inkubacija

  24. E E E E E ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA) 12 obeležena Ag-specifična At 6 Ispiranje Inkubacija

  25. E E ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA) 12 dodavanje supstrata 6 Kolorimetrijska detekcija

  26. ELISA detekcija antitela (detekcija At u serumu pacijenta) Ispitivani serum Antigen kojim je obložena ploča

  27. ELISA detekcija antitela (detekcija At u serumu pacijenta) 12 6 Ispiranje Inkubacija

  28. E E E E E E ELISA detekcija antitela (detekcija At u serumu pacijenta) Obeležena Ig-specifična At

  29. E E E E E E ELISA detekcija antitela (detekcija At u serumu pacijenta) 12 6 Inkubacija

  30. E E E E E E E E ELISA detekcija antitela (detekcija At u serumu pacijenta) Ispiranje

  31. E E E E 12 ELISA detekcija antitela (detekcija At u serumu pacijenta) 6 Kolorimetrijska detekcija

  32. Imunofluorescencija (IF) Koristi se za detekciju antigena u čvrstim uzorcima (npr. na ili u ćeliji/tkivu) ili antitela (tipično u serumu) Marker je fluorescentna boja (fluorohrom), a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo) Bazira se na principu emitovanja boje pod dejstvom UV svetla Signal se detektuje pomoću fluorescentnog mikroskopa Može da bude samo kvalitativna i eventualno semi-kvantitativna Obavlja se obično na mikroskopskim pločicama

  33. Detekcija Ag u/na ćelijama i tkivima DIREKTNA (DIF) (obeleženo primarno At) specifičnost IMUNOFLUORESCENCIJA Detekcija Ag u/na ćelijama i tkivima INDIREKTNA (IIF) (obeleženo sekundarno At) osetljivost Detekcija At u serumu

  34. Imunofluorescencija (primer 1) Helicobacter pylori Borrelia burgdorferi

  35. Imunofluorescencija (primer 2) Neutrofili

  36. Imunofluorescencija (primer 3) Glomerulonefritis

  37. F F F F DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) obeležena Ag-specifična At fiksirani uzorak

  38. F F F F DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) 12 6 Ispiranje Inkubacija

  39. F F DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) Ekscitacija Fluorescencija

  40. INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) neobeležena Ag-specifična At fiksirani uzorak

  41. INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) 6 Ispiranje Inkubacija

  42. F F F F F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) Obeležena Ig-specifična At Inkubacija

  43. F F F F F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) 12 6 Inkubacija

  44. F F F F F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) Ispiranje

  45. F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija Ag u čvrstom uzorku) Ekscitacija Fluorescencija

  46. INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta) Ispitivani serum fiksirani antigen

  47. INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta) 6 Ispiranje Inkubacija

  48. F F F F F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta) Obeležena Ig-specifična At Inkubacija

More Related