50 likes | 154 Views
Biblioteca de gDNA. Catarina Martins, LCB GENÉTICA MOLECULAR E HUMANA. Biblioteca gDNA. conjunto de clones de DNA que contêm coletivamente o genoma inteiro PREPARAÇÃO: isolar DNA digerir DNA com endonucleases de restrição
E N D
Biblioteca de gDNA Catarina Martins, LCBGENÉTICA MOLECULAR E HUMANA
Biblioteca gDNA • conjunto de clones de DNA que contêm coletivamente o genoma inteiro • PREPARAÇÃO: isolar DNA • digerir DNA com endonucleases de restrição • Inserir os fragmentos de restrição num DNA vetor de clonagem
Se a enzima de restrição faz cortes desencontrados (pontas unifilamentares) → Fragmentos de restrição são ligados diretamente ao DNA vetor (com a mesma enzima)
A E.Coli deve ser tornada permeável ao DNA (químicos ou pulsos de eletricidade) • As células transformadas são selecionadas mediante cultivo em condições em que o gene marcador selecionável do vetor é essencial para o crescimento.
Aplicações… • De sequenciamentos. Papel importante em toda a sequenciação do genoma de vários organismos, incluindo o genoma humano e vários organismos modelo.