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Taxonomía Fungal. La clasificación fungal es nueva y ha cambiado Clasificación, según Bar (1988): División Eumycota Subdivisión Mastigomycota Clase Chytridiomycetes Orden Spizellomycetales Familia Neocallimasticaceae. Género. El género es distinguido por la morfología
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Taxonomía Fungal • La clasificación fungal es nueva y ha cambiado • Clasificación, según Bar (1988): • División Eumycota • Subdivisión Mastigomycota • Clase Chytridiomycetes • Orden Spizellomycetales • Familia Neocallimasticaceae
Género • El género es distinguido por la morfología • Thallus: Monocéntrico y policéntrico. • Rizoide: Filamentos y bulbos. • Zoosporas: Uni- o Multiflageladas • Todos los géneros rizoides tiene filamentos, excepto las especies caecomyces. (Trinci et al. 1994)
Especies • Son separadas por sus características morfológicas y estructurales. • Las Piromonas y Sphaeromonas se asumía que eran protozoarios por lo que fueron cambiados a: Piromyces y Caecomyces (Trinci et al. 1994)
Fungis Policéntricos • Neocallimastix joyonii (Breton et al. 1989) Orpinomyces joyonii (Trinci et al. 1994) debido asu patrón de crecimiento policéntrico • Ruminomyces y Anaeromyces tienen características similares al monocéntrico
Aislamiento y Enumeración • Han sido aislados de: bovinos, ovinos, caballos, canguros y elefantes • En heces y tractos gastrointestinales y fluido ruminal • Orpinomyces fue aislado en charcos y pasturas de las vacas • La dieta animal tiene efectos sobre las poblaciones fungales (Trinci et al. 1994)
La biomasa fungal es difícil determinar • La estimación:método gravimétrico con digestión enzimática con quitina • El conteo (103 – 107 ml) no provee una adecuada estimación fungal • Para el tamaño de las poblaciones fungales se han utilizado diluciones en agar y otra soluciones
Condiciones para aislamiento • Anaerobiosis • pH de 6.5 a 6.7 • T° de 39° Materiales para aislamiento • Bufer: Carbonato/Fosfato • Fluido ruminal • Resazurina (indicador redox) • Carbohidratos • Antibióticos
Almacenamiento • T° de 39° C • Fibra en agar • Nitrógeno líquido • Dimetilsulfóxido • Enfriamiento a 1.5°C • Glicerol
Cultivos y Almacenamiento • Mantenidos por transferencia frecuente ( 2 a 7 días). • Algunas especies 24 a 48 horas. • Otros Intervalos semanales. • Isolados monocéntricos – 2 a 3 días. • Isolados policéntricos – semanalmente. • Mantenimiento largo en tiempo – 39 oC en fibra Sisal embebida en agar. • En nitrógeno líquido con dimetilsulfoxido como crioprotector para “fungi” anaeróbico sirve también para largo tiempo.
Preservación 1.5 oC por minuto hasta -70 oC con glicerol como crioprotector. • Resucitados a 39 oC. • Restos de esporas “fungi” ruminales, • Esporas anaeróbicas de heces. • Inducidas in vitro, no germinadas in vitro (Wubah et al., 1991b).
proceso de manipulación de formación y germinación de esporas – método de conservación. • “Fungi” anaeróbicos no son listados en la ATCC (American Type Culture Collection) como “Fungi” filamentosos o Protistas.
6. Protozoarios Ruminales6.1 Introducción • Basados en el tamaño relativo • Primeros microorganismos ser descubiertos • Muy móviles y viables en el rúmen y retículo • Inmóviles y aparentemente desintegrados en el omaso y abomaso. • Los Protozoarios celulares no identificados en intestino delgado. • Utilizados como alimento.
Explicación de Sobrevivencia • Especificidad del hábitat, esencialidad para el huésped. • Defaunación. • Alta especialización al rúmen o hábitat. • Actividades metabólicas (relación bacterias y “fungi”).
Protozoas Flagelados. • Baja población • Zoosporas Fúngicas (decrecimiento) • Limitados • Esquema de Clasificación ha cambiado algunas veces en 30 años. • Terminología difícil • Referencia a “Holotrichs” y “Entodiniomorphs”
Papeles en el rumen: • Clasificación de efectos • Medio ambiente del rumen • Componentes de la sangre • Metabolismo y digestión en el rumen • Sobre el animal • Fermentación de carbohidratos solubles • Holoctrichs como principal degradador • Entodinromorphs • Procurar incrementar la población de Holotrichs
Digestión de almidón • Entodiniomorphs como principales degradadores • Isotricha • Uso como fuente de energía o síntesis intracelular de polisacáridos • Principales productos
Digestión de Carbohidratos Estructurales • Actividad celulolítica (orden entodiniomorfos) • Epidinium caudatum, Eudiplodium maggii, Ostrocadinium dilobum y varias Spp Entodinium • Holotricha • Enzimas que degradan hemicelulosa (10 géneros, entodiniomorfos, subfamilias Diplodiniinae y Ophryoscoliceneae. • Baja actividad Orden holotricha
Monosacáridos, disacáridos y oligosacáridos • Spp de protozoarios poseen la hidrolasa glicosidica • Pectina es depolimerizada por los protozoarios (metanol, ac. Galacturónico o poligalactoranidos)
Digestión de la Proteína • Los entodiniomorfos digieren la caseína insoluble • Son importante en la degradación de proteínas insolubles • Sp isotricha (caseína soluble e insoluble) • Mayor actividad proteolítica en el citoplasma
Absorción y digestión de bacterias • -Gutierrez 1955. Isotricha. No se desarrolla sin bacterias. • -Probablemente bacterias proveen mayoría de N para crecimiento. • -Inhabilidad para biosintetizar o interconvertir aminoácidos (E. caudatum. • -Pérdida gradual de enzimas. • -Compuestos preformados por crecimiento de bacterias • -Protozoarios pueden “absorber” < 1% de total bacterial / minuto concentrados.
Productos de digestión de bacterias: Aminoácidos , 50% retenido VFA Amonia • Amoniácidos bacterianos en el animal, digestibilidad de proteina protozoaria. • Limitado pasaje ruminal. • Relacionado con normal después de alimentación.
Cambios en población de protozoarios • Establecimiento de poblaciones: • Contacto directo en etapas jóvenes. • Presencia en la boca de la madre • Saliva en las plantas • Aerosoles entre animales
Variación en el horario Diferencias entre entodiniomorfos y holotricos Alimentación 1 / día, entodiniomorfos 5-6 horas / gradual 20 a 22 hrs. Holotrichs, pico momentos antes o después de alimentación / Entodiniomorfos Diluciones asociadas a alimentación. Y cambios en crecimiento celular. Migraciones celulares: Paredes rumen, retículo y porción ventral.
OTROS FACTORES QUE AFECTAN LA CONCENTRACION DE PROTOZOARIOS DIETA forraje : concentrado • 20 – 40 % de concentrado maximiza la Ι protozoariosΙ • 60 % entodinium El efecto del concentrado se puede disminuir controlando el consumo FRECUENCIA DE ALIMENTACION GEOGRAFICAS i.e. Polyplastron multivesiculatum VARIACION ANIMAL i.e. Ophryoscolecidae y Caloscolex
Identificación de Protozoos ruminales • Como nombrar las partes de un protozoo. • Parte bucal hacia delante se le marca a las 12 hrs. · La parte mas cercana al observador se le denomina superficie superior y la contraria se le denomina superficie inferior.
