Raccolta,conservazione e trasporto dei campioni

1. Raccolta,conservazione e trasporto dei campioni

2. Raccolta,conservazione e trasporto dei campioni clinica Informazioni sui pazienti Nome, sesso, età Caratterist.clin. principali Agente sospettato Viaggi recenti Contatti malati artropodi/animali Gravidanza Vaccinazioni Tipo di campione e data laboratorio Informazioni sui campioni Campioni utili Tempi di raccolta Quantità Modalità di conservazione Modalità di trasporto

3. La quantità di virus non aumenta dopo il prelievo La carica infettante diminuisce più o meno rapidamente a seconda Del virus Del pH Della temperatura Del terreno di trasporto usato

4. Importanza della carica iniziale Campione giusto, prelevato al momento giusto

6. I campioni clinici nelle infezioni respiratorie1 Polmoniti Virus influenzali, Virus parainfluenzali, Adenovirus Virus resp. Sinciziale Rhinovirus Cytomegalovirus* Herpes simplex Varicella-zoster Hantavirus Tampone nasale o aspirato nasofaringeo BAL Sangue*

7. I campioni clinici nelle infezioni respiratorie2 Tratto resp. Sup/faringiti Virus influenzali Virus parainfluenzali Adenovirus Virus resp sinc Rhinovirus Enterovirus Virus di Epstein Barr* Tampone nasale o aspirato nasofaringeo,sangue*,

8. Aspirato nasofaringeo

10. I campioni clinici nelle infezioni del apparato digerente Gastroenteriti Rotavirus Virus di Norwalk Adenovirus Enterovirus Coliti Cytomegalovirus* Proctiti Herpes simplex virus papillomavirus Feci * Feci,biopsia,sangue T. rettale, t. lesione Biopsia lesione

11. I campioni clinici nelle infezioni al sistema nervoso Encefalite Herpes simplex, Varicella-zoster, CMV, EBV Arbovirus Adenovirus* Morbillo, rosolia, parotite** HIV Rabbia*** Meningite Enterovirus* Herpes simplex, Varicella, EBV Parotite PML JCV liquor *feci (2 campioni a distanza di 24-48 ore) ** urine biopsia cerebrale ***saliva

12. L’impiego del terreno di trasporto Per tamponi (nasofaringeo, rettale, cutaneo …) di cotone o dacron (non alginato) Per biopsie tissutali Prevenire l’essicamento e stabilizzare il virus Ridurre lo sviluppo di microrganismi contaminanti Senza diluire troppo il campione

13. Composizione dei terreni di trasporto Proteine (gelatina, albumina, … siero bovino) Soluzione salina tamponata (Hanks buffered salt solution) Antibiotici (penicilina 1000u/ml streptomicina 5 mg/ml nistatina 250 u/ml o fungizone 10 ?g/ml In alternativa: brodo sterile da batteriologia (Tryptose phosphate broth) 2-4 ml in provette con tappo a vite da 10-15 ml

14. Terreno di trasporto

15. Percentuale di recupero di alcuni virus e clamidie dopo diversi tempi di conservazione a 4-8°C

16. Quando prelevare i campioni Il più precocemente possibile dopo la comparsa dei sintomi Per virus respiratori entro 3-7 giorni Enterovirus entro 2-3 giorni (LCS) 1-2 settimane (feci)

17. La temperatura

18. La quantità Sangue ? EDTA 8 ml LCR 2-4 ml Feci 1-2 g Urine 5-10 ml

19. Preparazione dei campioni per l’isolamento Decontaminazione dei campioni da zone colonizzate da batteri o miceti centrifugazione aggiunta di antibiotici

20. Preparazione di campioni fecali Sospensione di feci al 10% : 2 gr in 20 ml PBS + sferette di vetro (0.5 cm diametro)* Agitare vigorosamente per 20’ Centrifugare a 4°C per 20 ‘ a 1500 g** Raccogliere il sopranatante e aggiungere antibiotici *per ricerca enterovirus si può aggiungere 0,5 ml di cloroformio **g=(11.7x10-7)RN2

21. Raccolta, conservazione, trasporto Condizioni diverse possono essere previste in relazione alle tecniche diagnostiche utilizzabili