1 / 8

Curso BMP5748 Parasitologia Molecular Objetivos do curso Estrutura do curso:

Curso BMP5748 Parasitologia Molecular Objetivos do curso Estrutura do curso:. 11.10. prova final. Clonagem de plasmídeos. 1. Desenhe uma estratégia para subclonar o gene da corismato síntase no vetor de expressão pGEX correto. CGCT GGATCC CAATGACCTGG... ...GATTGA CTCGAG GTC.

heba
Download Presentation

Curso BMP5748 Parasitologia Molecular Objetivos do curso Estrutura do curso:

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Curso BMP5748 Parasitologia Molecular Objetivos do curso Estrutura do curso:

  2. 11.10. prova final

  3. Clonagem de plasmídeos 1. Desenhe uma estratégia para subclonar o gene da corismato síntase no vetor de expressão pGEX correto CGCTGGATCCCAATGACCTGG... ...GATTGACTCGAGGTC Procure os mapas do pGEX na web

  4. Tarefa 13.9.2011 • Desenha PCR primers para amplificar a maioria da seguinte sequência omitindo a parte que codifica para o motivo transmembrana “FTYFYL”. Inclua sítios de restrição adequados para subclonagem em pGEX4T1 (para posterior expressão como fusão com GST). • De que gene se trata? GAAAATGGAGAAAATACATGTAGTGAAGAATCTAAAAACTATTGTGCATGTGTGAAAGTATGGTTAGAAAAAAAGAAAAA TGAATGGGATCAAATAAAAAAACATTTTAAAGATCGAAAATCGGATGATGGTGATACTGTTGTGTCTAAAGTTAGAAATT TCTTGGAGACCTTGATACCTCGAATTGCTCCTAAAAAAAATAATGGAGAAGTTACAGAATTAAGTGATTTAGAAAAGTCA CTTGGATGTAATTGCGCTGGGAGAGCAGAAAATAGTAAAGAAGATGAAAAAGAAGATGTTGTTCTATGTTTGCTCACAAA GCTTGAAGATAAAGCAAACAAGTGTAAAGAAGACCAAAAACCTAATGGCGAAAACCAAGCACAAACGTGTGAAAAATCCG CCCCCGTTGAAGACGAAGACGATGAACCCCTTGAAGAGGAAAACCCAGTTACACAACCGAACATTTGTCCGAAAGTGGAA ACAACAGAAGAAACAGTGGATGAAGGCAAGTGTGAAGAAGACACAGTCACTCCTAGTCTTGGACCCAAAGATGATAGTGA AAAAGATGAAAAAAAAGAGGAAAATAGTGAAGACACAACGGCAGCAGAAGGAGAAGAAAATGGTGCTCCTGGATCTAGTG GCACACCTCCACCTCCCCCTGCGGCGCCTCCATCAACCCCAGCAAAAACAAAAGAAAGCAAAAAACCAAAATCAACAAAA AAACCTCGAATCAAAACCCTTAATGTATTGGACCACCCCGCTGTCATACCCGCCCTCATGTCTTCTACCATCATGTGGAG TATTGGTATTGGTTTTGCTACATTCACTTATTTTTATCTAAAGAAAAAAACCAAATCATCTGTTCGAAAT

  5. Tarefa 15.9. Fusion-PCR Insere o epítopo YENDIEKKI no ponto indicado do gene abaixo mediante PCR de fusão e subclone o produto final em pcDNA3.1. O seu orientador deu gDNA do organismo, dinheiro para comprar 4 oligos e BamH1 e Xho1 (plus Taq pol etc.) 1 atggagaaca tcacatcagg attcctagga cccctgctcg tgttacaggc ggggtttttc 61 ttgttgacaa gaatcctcac aataccgcag agtctagact cgtggtggac ttctctcaat 121 tttctagggg gaactaccgt gtgtcttggc caaaattcgc agtccccaac ctccaatcac 181 tcaccaacct cctgtcctcc aacttgtcct ggttatcgct ggatgtgtct gcggcgtttt 241 atcatcttcc tcttcatcct gctgctatgc ctcatcttct tgttggttct tctggactat 301 caaggtatgt tgcccgtttg tcctctaatt ccaggatctt caaccaccag cacgggacca 361 tgcagaacct gcacgactcc tgctcaagga acctctatgt atccctcctg ttgctgtacc 421 aaaccttcgg acggaaattg cacctgtatt cccatcccat catcttgggc tttcggaaaa 481 ttcctatggg agtgggcctc agcccgtttc tcctggctca gtttactagt gccatttgtt 541 cagtggttcg tagggctttc ccccactgtt tggctttcag ttatatggat gatgtggtat 601 tgggggccaa gtctgtacag catctggagt ccctttttac cgctgttacc aattttcttt 661 gtctttgggt atacatttaa Aqui.

  6. Tarefa 27.9. Desenvolva uma estrategia para montar um vetor para testar RNAi constitutivo em Plasmodium no vetor pDCdXho1, utilizando o fragmento do gene hexokinase clonado em vetores A e B mostrados. Bgl2 Nde1 Sph1 Inserir aqui Sal1 EcoRV Pst1 Vetor A Sma1 Xba1 EcoR1 Vetor B BamH1 Bgl2 Pst1

  7. Tarefa 29.9.2011 Abaixo está mostrado um vetor de recombinação dupla em Plasmodium. A partir desse, monte um plasmideo para knockout do gene PF14_0511 (achar em www.plasmodb.org). Feliz com seu trabalho anterior e com verba nova, seu chefe permitiu a compra de oligos e pode usar qq enzima de restrição. Note que as modificações no vetor devem ser nos lugares indicados com *. * *

  8. Tarefa 4.10.2011 Crie um vetor com dois marcadores de resistência (hDHFR e BSD) a partir dos vetores abaixo. Na sua estratégia, considere o tamanho de fragmentos a serem excisados de um vetor (mesmo tamanho do fragmento restante do vetor ao excisar?)

More Related