1- المقدمة:

1. 1- المقدمة: يمثل جنس البكتريا (Pseudomonas. Sppl)، مجموعة كبيرة ومهمة من البكتريا السالبة لصبغة كرام والتي توجد بأعداد كبيرة حرة المعيشة في التربة والمياه العذبة والبيئات المالحة والعديد من البيئات الطبيعية الاخرى فضلا عن كونها موجودة مع النباتات والحيوانات كمسببات مرضية. وهذه البكتريا عصيات مستقيمة أو منحنية قليلا ومتحركة بسوط قطبي غير مكونه للأبواغ وهوائية مجبرة وتنمو بمدى حراري يتراوح بين (4 – 42 مo) ورقم هيدروجيني مثالي بين (7 – 9)، وبتلك القدرة على استغلال العديد من المصادر الكاربونية مصدرا للطاقة العضوية كما انها موجبة لفحص الاوكسيديزوالكاتلزيز وغير مخمرة للكاربوهيدرات إلا إنها مستهلكة لها بواسطة عمليات الأكسدة. (عبد الملك وعبد الرحمن)

2. يضم جنس Pseudomonas.Spp أنواع كثيرة منها المتألق ومنها غير المتألق وتمتاز المتألقة بقابليتها على أنتاج صبغة البايوفردين (Pyoverdine) وهي صبغة خضراء مصفرة متألقة في مقدمة المركبات العديدة ذات الفاعلية المضادة للمايكروبات التي تنتجها بكتريا الــ (Pseudomonas). (عبد الملك وعبد الرحمن). على خلاف بكتريا (Pseudomonas aeruginosa) التي وجدت بكثرة في العينات السريرية، (عبد الملك وعبد الرحمن). ويعد استخدام الاحياءالمجهرية في الاحياء التطبيقية من المسارات المهمة التي توسع الاهتمام بها عالميا لما لها من مردود اقتصادي هام فضلا عن تلقيها لمصادر تلوث البيئة. من بين الاحياءالمجهرية التي نالت اهتماما واسعا في مجال المقاومة الحيوية بكتريا الزوائف والتي تعد ايضا من البكتريا المحفزة لنمو النبات (Plans growth promoting rhizobacteria). (Klopper, 1980) كما أظهرت قدرة مهمه في كبح نشاط العديد من المسببات المرضية.(Lottmann, 2000).

3. من بين الاحياءالمجهرية التي نالت اهتماما واسعا في مجال المقاومة الحيوية بكتريا الزوائف والتي تعد ايضا من البكتريا المحفزة لنمو النبات (Plans growth promoting rhizobacteria). (Klopper, 1980) كما أظهرت قدرة مهمه في كبح نشاط العديد من المسببات المرضية.(Lottmann, 2000).

4. 2-1 التصنيف:- Kingdom:- Bacteria. Phylum:- Proteobateria. Class:- Gamma Proteobacteria. Order:- Pseudomonadales. Family:- Pseudomonadaceae. Genus:- Pseudomonas. Species:- P. aeruginosa. 2- استعراض المراجع Literature Review

5. 2-2 عائلة الــPseudomonadaceae تقع عائلة Pesudomonadaceaeضمن مجموعة الجراثيم العصوية السالبة لصبغة كرام غير المخمرة لسكر اللاكتوز. Non – Fermentative Gram – negative bacilli وأفراد هذه العائلة جراثيم عصوية مستقيمة قليلة الانحناء، هوائية اجبارية العديد من السلالات التابعة لها متحركة بواسطة سوط أو أكثر من الاسواط القطبية Polar Flagella، تستهلك الكلوكوز وبقية الكاربوهيدرات هوائيا وغالبا ما يكون افرادها يمتلكون النتيجة الموجبة اتجاه فحص السايتوكرومأوكسديزCytochormeOxid.

6. 3- الزائفة الزنجاريةPseudomonas areuginosa • 1-3 تسمية الميكروب من أين جاءت:- • المقطع الاول للاسم العلمي كلمة Pesudomonas تعني وحدة خاصة (false unit) حيث تعني باللاتينية Pseudo زائف وmonas بوحدة واحدة، الكلمة استعملت مبكرا في تاريخ علم الاحياء الدقيقة للإشارة الى الجراثيم. المقطع الثاني للاسم العلمي كلمة aeruginosaتعني باللاتينية بالزناجر (صدأ نحاسي) هذا يصف الصبغة الجرثومية الخضراء المزرقة عند رؤيتها في الزراعة المختبريةللــP. aerugiosa.

7. 3-2 الخصائص العامة Characteristics يمكن التعرف بشكل أولي على P. aerugiosaعن طريق خروج رائحة تشبه العنب خارج الجسم، أما التعريف السريري والطبي له عن طريق انتاجالبايوسينينوالفلورسين الإضافة الىانها تستطيع ان تنمو على درجة حرارة 42Co. يقع أغلب أنواع جنس الـــــPseudomonas ضمن المجموعة الاولى من الحمض النووي الرايبوزيالرايبوسوميrRNAgroup I والتي تضم:

8. P. aeruginosa. Pseudomonas Putida. P. mendocina. P. stutzeri. P. species group 1. P. fluorescens. P. Pseudoalcaligenes. P. alcaligenes. (Konemanetal., 1997).

9. أفراد هذا الجنس جراثيم عصرية أبعادها m 5-1.5 X 1-0.5 والعديد منها يخزن الطاقة من خلال تراكم مادة Poly B-hydroxybutyrate والتي تظهر بشكل حبيبات غامقة اللون، هذه الخلايا الجرثومية غير محاطة بمحفظة، لا تمتلك سبورات، غير مخمرة لسكر اللاكتوز، ومتحركة بواسطة اسواط قطبية واحدة أو أكثر، هوائية اجبارية وتستخدم الاوكسجين مستقبلا نهائيا للإلكترونات في السلسلة التنفسية، والعديد من أنواع هذا الجنس يفشل في النمو في الظروف الحامضيةPH 4.5 والعديد منها لا يحتاج الى عوامل نمو Growth factors موجبة لفحص الكتاليزCatalase.

10. انعزلات النوع P. aeruginosa امتازت بقدرتها على النمو في درجة الحرارة 42 مo وعدم قدرتها على النمو في درجة الحرارة 4 مo، ونمت بمستعمرات متألقة في وسط King A (أي موجبة لاختبار وانتاجالبايوسين) واعطت نتيجة موجبة لفحص انزيمالجيلاتينيز والحركة واستهلاك السترات ونتيجة سالبة لفحص انزيمالليسيتين واختبار احمر المثيل وانتاجالاندول. (السالم وعبد الرحمن)

11. يسبب النوع P. aeruginosaالعديد من الامراض في الانسان فهي تسبب التهاب الجروح والحروق والتهاب المجاري البولية UTI والتهاب ذات الرئة وغالبا ما تكون مسؤولة عن تسمم الدم Septicemia في مرضى الحروق وتجرثم الدم Bacteremiaفي المصابين بالإيدز AIDS وهي السبب الرئيسي لقرحة الفراش Bedsore كما تصيب الرئة وتؤدي الى التليف الكيسي Cystic fibrosis وبالتالي الموت بسبب فشل الرئة بالاستمرار في عملية التنفس نتيجة الافرازات المخاطية المتمثلة بمتعدد السكريات الــــAl ginate. (Mathee et al. 1991: Hauser et al, 1998; Prescott et al, 1996). وبسبب قدرة هذه الجرثومة على التواجد في بيئات مختلفة مثل البيئات الرطبة الدافئة والبيئات الفقيرة الحاوية كميات ضئيلة من المواد العضوية ومياه الصرف والجلد والمحاليل غير المعقمة وأقنعة التنفس الاصطناعي هذا جعلها المسؤولة عن 5 – 15% من اصابات المستشفيات Hospital infections وجعلها الجرثومة المعروفة لدى وحدات العناية المركزة (ICU) Intensive Care Unit. (Loureiro et al, 2002; Finegold and Matin, 1982).

12. 3-3 عوامل الضراوة:- يعود السبب في ضراوة النوع P. aeruginosaالى بعض العوامل الخلوية والخارج خلوية Cellular and extra cellular factors. 3-3-1 العوامل الخلوية:- تشمل العوامل الخلوية: الشعيرات PiliوالاسواطFlagella ومتعدد السكر الدهنيLipo Poly Saccharideاذ يمتلك هذا النوع الشعيرات القطبية نوع Polar type IV والتي تساعد هذا النوع على سحب نفسه على الاجسام الصلبة.

13. 3-3-2 أما العوامل الخارج خلوية:- فتتمثل بتلك البروتينات والانزيمات التي يفرزها النوع (P. aeruginosa) في الوسط الخارجي مثل Exoenzyme S, T, V و Exotoxin A و الــPhospho Lipase C (عبارة عن انزيم محلل لدم Haemolysin) والانزيمات المحللة لبروتين مثل (al Kalineprot) وElastaseوالانزيمات العنقودية المحللة لبروتين Staphylolytic proteases مثل Las D, Las A. (Folders et al, 2000; Pritchard and Vasil, 1986).

14. 3-4 الاوساطالزرعية التي تنمو عليها الزائفة الزنجارية:- • على الاگار المغذي: تنمو هذه الجراثيم بسهولة (وتبدو المستعمرات رمادية، ذات حواف غير منتظمة "مشرشرة"، مخاطية) فتفرز العصيات الزرقاء في هذا الوسط ومعظم الاوساطالزرعية نوعين من الصبغة (صبغتين) في الاوساط هما: • البيوسيانين: وهي صبغة زرقاء. • الفلوروسيئين: وهي عبارة عن ومضات (خضراء – صفراء) لذلك تتصف مستعمراتها بلمعة معدنية مميزة. • وتنطلق من المزروع رائحة تشبه (رائحة زهر الشمس) أو اللوز المر. • في المرق العادي: تنمو بسرعة وبكثرة مع تلون الوسط باللون الاخضرالمزرق. • على وسط سيمون سترات: تنمو بسرعة وتلون الوسط باللون الازرق. • في وسط الجيلاتين: تميع الجيلاتين بسرعة مع تلوين الوسط باللون الازرق. • في الحليب: تخثر الحليب. • وسط كليغر الحديدي: لا تخمر الكلوكوز واللاكتوز = بقاء لون الوسط أحمر لا تطلق غاز H2S = (عدم ظهور لون أسود). • لا تطلق غاز (Co2). • اختبار الاندول: سلبية الاندول. • اختبار اليورياز: سلبية اليوريا. • تسبب الخارجية من العينات السريرية انحلال دموي من النمط B على اكار الدم. (:mhtml:file://I\ الزائفة الزنجارية).

15. 4- التركيب الجيني:- انجينيوم الخلية البكتيرية يتكون من كروموسوم منفرد مع جزيئات من الــDNA والتي تمثل البلازميداتاذ باستطاعة هذه الجزيئات اذ تتضاعف بمعزل عن الكروموسوم وان قسما من هذه البلازميدات تدعى R-Plasmid تحمل صفة المقاومة للمضادات الحيوية والمعادن الثقيلة. (1975, Rownd, Hashimoto).

16. 1-4 البلازميداتThe Plasmids فالبلازميد هو جزيئةDNA ثنائية الشريط molecules double strands DNA غالبا ما تكون حلقية الشكل، تتراوح أحجامها من 1 – 1000 kbp، وهي تمثل كوحدة وراثية خارج كروموسومية، تتواجد طبيعيا في البكتريا وفي بعض أنواع الخمائر مثل Saccharomycescervisiae يتميز البلازميد بأنه ذاتي التضاعف Autonomous replication ايلنه يتضاعف بشكل مستقل عن تضاعف الكروموسوم البكتيري. (فيصل، 2003).

17. 4-2 الخصائص العامة للبلازميدات General Characteristics Of The Plasmids • توجد البلازميدات بأشكال مختلفة، النوع السائد هو جزيئةDNA حلقية الشكل واحيانا توجد بشكل خطي Linear DNA molecule. • البلازميداتهي جزيئات صغيرة الحجم تتراوح أحجامها من 1–1000kbp. • على الرغم من أنه يتضاعف بشكل مستقل عن تضاعف الكروموسوم البكتيري automous replication الا انه يعتمد على انزيمات الخلية لإنجاح عملية التضاعف والاستنساخ. • كل بلازميد يحتوي واحدة على الاقل من منطقة اصل التضاعف origin of replication. • اكثرالبلازميدات تحتوي على جينات مسؤولة عن ابراز الطراز المظهري الخاص بالكائن الحي، مثل صفة المقاومة للمضادات الحياتية.

18. 4-3 أنواع البلازميداتType Of Plasmid • تختلف اسس تصنيف البلازميداتالىانواع مختلفة بالاعتماد على: • التوافق Compatiblity. • الاندماج مع الكروموسوم البكتيري Integration with bacterial chromosome. • اكمانية انتقاله الى الخلية البكتيرية الاخرىAbility to transfer to another bacteria. • الوظيفة Function. • تدعى البلازميدات التي ترافق الخلية البكتيرية حتى بعد تضاعفها وانتقالها وانتقالها الى الخلايا البنويةبالبلازميدات المتوافقة Plasmid Compatible في حين تدعى البلازميدات التي بالامكان فقدانها من الخلية البنويةاثناء الانقسام بالبلازميدات غير المتوافقة Plasmid incompatialeكذلك توجد البلازميدات بشكل حرفي السايتوبلازم غير مندمج مع الكروموسوم تدعى بالبلازميدات غير المندمجة Plasmid nonintergratedأو أنه يكون متحد مع الكروموسوم البكتيري ويدعى في هذه الحالة Episome. وتدعى البلازميدات المنتقلة الى الخلية المستلمة بالبلازميدات الاقترانية Conjugation Plasmid وتكون هذه البلازميدات حاوية على Tra genes المسؤولة عن عملية انتقال المادة الوراثية البلازميدية.

19. ويمكن ايضا تصنيف البلازميدات بالاعتماد على الوظيفة الى: • عامل الخصوبة fertility factor or F Plasmid: • وهو بلازميد ينضم عملية النقل الجنسي (الاقتران البكتيري) للمادة الوراثية بين الخلايا البكتيرية. يحتوي F plasmid على مجموعة من الجينات مسؤولة عن عملية التضاعف الذاتي، وعن عملية تكوين الاهداب الجنسية Sex pili. • 2. بلازميد مقاومة المضادات الحياتية Resitant plasmid (R plasmid): • يحتوي هذا النوع من البلازميدات على مجموعة من الجينات المسؤولة عن مقاومة البكتريا للمضادات الحياتية أو السموم البكتيرية. • 3. Col – plasmid: • هذه البلازميدات تحتوي على جينات تشفر للسموم البكتيرية والتي • تدعى بالبكتريوسينbacteriocinالتي تعمل على قتل السلالات المختلفة • لنفس الجنس البكتيري. تدعى السموم المفرزة من البكتريــــا E. Coli بالــ • Colicin ومن هنا جــــاءت التسميــــة.

20. 4. انزيمات التحلل او التفسخ Degradative Plasmid: • تحتوي هذه البلازميدات على جينات تجهز البكتريا مثل بكتريا pseudomonas بالانزيمات المتخصصة التي يمكن للبكتريا من هضم بعض المشتقات النفطية والمركبات الهيدروكاربونالاروماتية. XyL – plasmid الذي يساهم في تحلل الزايلينXylene و Toleune. • 5. بلازميداتالضراوهVirulence plasmid: • بعض اجناس البكتريا مثل Shigella تمتلك عوامل ضراوة Invasin و Interotoxin محمولة على البلازميد، haemolysin لبكتريا E. coli. • 6. بلازميدات المقاومة للعناصر الثقيلة Heavy metal resistant Plasmide: • هي البلازميدات تكسب البكتريا صفة المقاومة لبعض العناصر الثقيلة مثل الزئبق والنيكل والرصاص مثال على بكتريا E. coli. و P. aeruainosa و P. florescens. • 7. النواقلVectors: • تدعى البلازميدات المستخدمة في الهندسة الوراثية بالنواقل وتستخدم في عملية نقل الجينات من احد الكائنات الى الكائن الاخر وتكون على الاغلب حاوية على معلومات وراثية genetic marker مثل المقاومة للمضادات الحياتية التي يمكن انتقائها مختبريا.

21. 5- المقاومة للمضادات الحيوية وفي السنوات اللاحقة ازداد اهتمام البحوث بالمواد الكيميائية المنتجة من قبل الاحياءالمجهرية والتي يمكن ان يكون لها تأثير على غيرها من الاحياءالمجهرية، أطلق على هذه المواد تسمية مضادات حيوية Antibiotics كان حصيلة هذه البحوث اكتشاف الستريتومايسينوالتتراسايكلينوالكلورامفينكول وغيرها من المواد العوامل المضادة (Jawetzetal, 1972) ان أحد المشاكل الرئيسية المترافقة مع الاستعمال الغزير للمضادات الحيوية هو نشوء سلالات بكتيرية مقاومة لهذه المضادات وهذا هو أحد الامثلة على الفاعليات غير المنتهية في الطبيعة والتي فيها تطور الاحياء قدرتها على تحمل ظروف بيئية جديدة (perlczar and chan, 1981).

22. وتقاوم الاحياءالمجهرية المضادات الحيوية بميكانيكيات مختلفة مثل افرازالانزيمات التي تعمل على تحطيم المضاد الحيوي مثل انزيماتالـــpenicillinasesأو تقليل نفاذية الغشاء البلازمي على مرور المضاد الحيوي كما قد تعمل الاحياءالمجهرية على الزيادة في الانتاج بعض المواد الايضية والتي تشبه المضاد وبالتالي تدخل محله في انتاج بعض المركبات المهمة حيويا مثل المقاومة لمركبات السلفا، قد تعمل الاحياءالمجهرية على زيادة انتاجانزيم معين الذي يعمل عليه المضاد أو قد تستخدم مسار حيوي بديل عن المسار الاول الذي يثبط من قبل المضاد وفي بعض الاحيان قد تغير الاحياءالمجهرية تركيب الانزيم وبهذا يصبح مقاوم تجاه المضاد الذي كان يؤثر عليه أو قد يحدث تغيير بسيط في الرايبوسوم بحيث يصعب على المضاد الارتباط كما في المقاومة للستربتومايسين (Lee, 1999) أن جميع ميكانيكيات مقاومة المضادات الحيوية نتجت عن الطفرات Mutation، اعادة التكوين Recombination واكتساب البلازميداتAcquisition of plasmids (Stanieretal, 1980).

23. الاهداف والتوصيات: • التعرف على الانواع البكتيرية الممرضة الموجودة مع بكتريا Pseadomonasومعرفة التركيب الوراثي لها. • يجبب توخي الحذر والحيطة من حالة الاصابة لمرض التهاب المجاري البولية والتعرض لحوادث الحروق والجروح منعا لحصول تلوث بكتيري أو الاصابة بتسمم الدم البكتيري لذا يجب المواظبة على التعقيم المستمر واخذ العلاج المطلوب بصورة صحيحة. • عدم استخدام المضادات الحيوية المتكرر والعشوائي لأي حالة التهاب وبدون استشارة الطبيب. • دراسة موسعة أكثر للمحتوى الوراثي لبكتريا الـــP. areugensaباستخدام التقنيات للتعرف على مواقع الجينات المسؤولة عن المقاومة لمضادات حيوية متوفرة أخرى. • استخدام التعقيم والتطهير المستمر في المستشفيات لمكافحة البكتريا التي تسبب عدوى المستشفيات حفاظا على صحة المرضى الراقدين. وكذلك اللجوء فورا لمعالجة الاخماجالجاهزية بالزائفة الزنجارية باستخدام مضاد تكون هذه الجراثيم متحسسة تجاهه، على الرغم من أن الاستجابة تكون محدودة لأن الزوائف تتميز بمقاومتها الطبيعية والشديدة للعديد من المضادات.