1 / 25

Karen A. Krogfelt, prof Martin S. Bojer, phd-stud Afd Mikrobiologi og Infektionskontrol

Varmeresistente bakterier i sygehusmiljøet. Karen A. Krogfelt, prof Martin S. Bojer, phd-stud Afd Mikrobiologi og Infektionskontrol Statens Serum Institut. Antibiotikaresistensens onde cirkel. The good ( ydre overflader, ex hud ) MRSA The bad ( indre overflader, ex tarm ) ESBL , VRE

jatin
Download Presentation

Karen A. Krogfelt, prof Martin S. Bojer, phd-stud Afd Mikrobiologi og Infektionskontrol

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Varmeresistente bakterier i sygehusmiljøet Karen A. Krogfelt, prof Martin S. Bojer, phd-stud Afd Mikrobiologi og Infektionskontrol Statens Serum Institut

  2. Antibiotikaresistensens onde cirkel B. Kristensen: ,SSI

  3. B. Kristensen, SSI The good (ydre overflader, ex hud) MRSA The bad (indre overflader, ex tarm) ESBL, VRE The ugly ( stor spredningspotentiale, høj mortalitet) NDM-1 og andre carbapenemase-dannende bakterier CD027 Multiresistente bakterier

  4. Varmeresistens ….

  5. Historien… Gentamicin-resistente enterobakterier, Hvidovre Hospital. Mindst 10 infektioner over 2-år på intensivafdelingen af multiresistente K. pneumoniae-isolater, kapsel serotype K28 Ribotypning viste at isolater er klonale

  6. Virulens undersøgelse af C132-98 • Adhæsion til humane epithelceller • Evne til at kolonisere tarmen • Infektionsevne i urinvejsinfektions model • C132-98 er ikke mere virulent end • andre kliniske K. pneumoniae isolater • (Struve & Krogfelt, 2004)

  7. Har C132-98 forøget evne til at persistere i hospitalsmiljøet ? C132-98 overlever ved høje temperaturer 58°C Special-apparatur, f.eks. endoskoper, varmebehandles ved temperaturer under 60 °C. Temperatur kritisk for at minimere ”bacterial load” (Zühlsdorf et al., 2003)

  8. Varmeresistens gen ? C132-98 har mange plasmider Er varmeresistens plasmid-kodet? C132-98 plasmid DNA skæres med Sau3A Ligeres med plasmid vektor Plasmid-klon bibliotek i E. coli Forskellige plasmid kloner

  9. Selektion af varmeresistens Præ-selektion pool Gentagen varmeselektion Post-selektion pool 384 clones 1 klon? Restriktionsanalyse af individuelle kloner Restriktionsanalyse af individuelle kolonier 4x 58 °C i 5 min Én varmeresistent klon selekteret

  10. Varmeresistent klon (8.187 kb fragment fra K. pneumoniae C132-98) 93 aa 189 aa 967 aa 228 aa 152 aa 304 aa 295 aa sHSP Clp ATPase hypothetical proteins Putative metalloprotease sHSP Sekventering af varmeresistent klon Clp ATPase genet (clpK) medierer varmeresistens

  11. kloning af clpK 53°C clpK-genet alene medierer varmeresistens

  12. K. pneumoniae C132-98 varmeresistens = clpK? 53°C

  13. ClpK på konjugative plasmid C132 C132Δclp DH5α tetracycline resistant transformants ClpK på største plasmid (ca.150 kb) i C132-98

  14. Protein destined for degradation Clp hexamer Catalyzed denaturation Degradation Binding ClpP double-heptameric proteolytic complex Translocation (Modificeret fra Karzai et al. (2000)) Funktion af Clp ATPpaser Funktionel gruppe I Clp ATPaser involveret i ClpP-afhængig proteolyse (ClpA, ClpC, ClpX)

  15. Pore Insoluble aggregate ClpB cross-section Interaction of ClpB, DnaK & protein aggregate Extraction & threading of polypeptide Spontaneous or chaperone mediated refolding DnaK chaperone system Release of unfolded polypeptide (Modificeret fra Doyle et al. (2007)) Funktion af Clp ATPpaser Funktionel gruppe II ClpP uafhængige, medierer protein-disaggregering (ClpB)

  16. P tripeptide ClpA ClpX ClpC Gram-negatives Both Gram-positives N-terminal AAA-1 AAA-2 C-terminal AAA-2 C-terminal N-terminal AAA-1 M-domain AAA-2 C-terminal N-terminal AAA-1 M-domain AAA-2 C-terminal ClpK er en ny type Clp ATPase Funktionel gruppe I (ClpP afhængig proteolyse) Funktionel gruppe II (protein disaggregering) Both ClpB ClpK N-terminal AAA-1 M-domain AAA-2 C-terminal Bojer et al., 2012

  17. clpK hos K. pneumoniae 105 kliniske isolater screenet med clpK specifik DNA probe 31 isolater positive! ClpK er vidt udbredt blandt kliniske isolater (30%)

  18. clpK- K. pneumoniae er varmeresistente 53°C Bojer et al., 2010

  19. clpK og K. pneumoniae biofilm Varmebehandling af biofilm 5 min v. 58 °C Bojer et al., 2011

  20. clpK på ESBL-plasmider Dansk samling af ESBL-positive K. pneumoniae blodisolater fra 2008 (Lester et al., 2010) 24% positive Findes i større sjællandsk klon ST16 Bojer et al., 2012

  21. clpK på ESBL-plasmider + tet, neo, sulpha, trim!! 53°C 53°C

  22. I ALT • Varmeresistens i persisterende stamme på sygehus • Varmeresistens er plasmid-kodet og medieret af ny type af ClpATPase :clpK • clpK er hyppigt forekommende hos kliniske K. pneumoniaeisolater • Tydelig sammenhæng mellem tilstedeværelse af clpK og varmeresistens • clpK medierer varmetolerance også for biofilm • clpK er påvist på konjugerbart multiresistens-plasmid i bl.a. udbredt sjællandsk ST16-klon

  23. I ALT • Tydelig sammenhæng mellem clpK og varmeresistens • clpK medierer varmetolerance også for biofilm • clpK er på konjugerbart multiresistens-plasmid

  24. Hvad så? • Giver ClpK anledning til andre stress-fænotyper? • Findes clpK i andre relevante species? • Fødevare-sikkerhed/tilberedning? • Vask ved lav temperatur? • ClpK selektion??

  25. TAK Deltagende parter 384 clones 1 klon Anette M. Hammerum , SSI Hanne Ingmer, KU-Sund Dennis S. Hansen, Hillerød Sygehus Carsten Struve, SSI 58 °C i 5 min

More Related