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Précipités jaunes orangés = Tooéléite. As=298. As=277. (AsIII/AsV) = 0,95. (AsIII/AsV) = 0,59. As=75,7. As=175. (AsIII/AsV) = 0,23. (AsIII/AsV) = 0,10. Stromatolites. AsIII-FeIII. AsV-FeIII. SITE DE CARNOULES. STRATEGIES UTILISEES. Prélèvement où est observée

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Presentation Transcript

  1. Précipités jaunes orangés = Tooéléite As=298 As=277 (AsIII/AsV) = 0,95 (AsIII/AsV) = 0,59 As=75,7 As=175 (AsIII/AsV) = 0,23 (AsIII/AsV) = 0,10 Stromatolites AsIII-FeIII AsV-FeIII SITE DE CARNOULES

  2. STRATEGIES UTILISEES Prélèvement où est observée une forte disparition de l’arsénite soluble 1 2 Isoler une souche d’Acidithiobacillus ferrooxidans et étudier son rôle dans la bioremédiation de l’arsenic Isoler une espèce bactérienne utilisant l’arsenic comme source énergétique

  3. Gram négative source de carbone: CO2 source d’azote: N2, NH4+ mésophile oxyde les composés réduits du soufre Tolérance aux métaux acidophile et le fer ferreux Acidithiobacillus ferrooxidans

  4. Disparition d ’AsIII, As et FeII en présence d ’A. ferrooxidans ROLE d’A. ferrooxidans Titration de l ’arsenic et du fer en présence d’A. ferrooxidans dans le milieu de culture. 100 AsIII As Total FeII AsV 80 As III % restant en phase aqueuse As total 60 40 Fe II 20 0 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 Jours

  5. Co-précipitation d ’AsIII et FeIII par A. ferrooxidans ROLE d’A. ferrooxidans précipité Absorbance normalisée A. ferrooxidans CC1 FeII précipité Energie

  6. X mois X sous-cultures en milieu (9K pH3,5 + AsIII) Thiomonaset Burkholderia n ’oxyde pas AsIII en AsV oxyde AsIII en AsV ISOLEMENT D’UNE BACTERIE OXYDANT L’ARSENIC Prélèvement où est observée une forte disparition de l’arsénite soluble Amplification et Séquençage du gène codant pour l'ARN ribosomal 16S

  7. AsIII AsV As total Oxydation de l ’AsIII en AsV par Thiomonas [As total] ne varie pas Disparition de l’AsIII Apparition de l’AsV DOSAGES ARSENIC Dosages arsénite, arséniate, arsenic total dans le surnageant de culture en milieu (9K pH3,5 + AsIII) de Thiomonas 100 80 % restant dans la phase aqueuse 60 40 20 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 0 Nombre de jours 0,0

  8. PHYLOGENIE 0.02 0.092 E. coli K12 0.010 A. ferrooxidans ATCC23270 0.014 0.011 A. thiooxidans ATCC19377 0.054 0.024 A. caldus DSM8584 0.065 Thiomonas cuprina DSM5495 Thiomonas spYnys3 0.031 Thiomonas spYnys1 0.014 0.017 Thiomonas 3AS 0.025 Thiomonas. thermosulfata ATCC51520 0.026 Thiomonas CO2 0.027 Thiomonas C19

  9. PHYSIOLOGIE DE Thiomonas • acido-tolérante : pousse à des pH entre 3,5 et 7,6 • mésophile : pousse entre 20°C et 37°C • autotrophe • métabolisme énergétique versatile, ses sources d’énergie étant soit organiques, soit inorganiques

  10. Extraits bruts « As » Fraction soluble « As » Fraction membranaire « As » Extraits bruts Fraction soluble Fraction membranaire Activité enzymatique au niveau des membranes. ACTIVITE ENZYMATIQUE Activité enzymatique plus importante dans les cellules cultivées en présence d’arsenic.

  11. ORGANISATION GENETIQUE DU LOCUS aox aoxA aoxB moaA phnD oxyS Alcaligenes faecalis oxyS aoxA aoxB aoxC aoxD Cenibacter arsenoxidans aoxA aoxB oxyS Thiomonas

  12. NORTHERN BLOT + - + - + - As Taille kb Taille kb 5,75 9,49 7,46 4,40 3,25 2,37 1,35 0,24 Exposition 1h Exposition ON Le gène de l’arsénite oxydase appartient à un opéron. Régulation transcriptionnelle en présence de l’arsenic.

  13. Bioremédiation de l ’arsenic par précipitation (A. ferrooxidans) et oxydation (Thiomonas). Isolement d’une souche de Thiomonas ayant une arsénite oxydase. Arsénite oxydase localisée dans la fraction membranaire Le gène codant pour l’arsénite oxydase appartient à un opéron. Régulation transcriptionnelle de cet opéron par l’arsenic. CONCLUSIONS

  14. PERSPECTIVES Acidithiobacillus ferrooxidans: Etude du métabolisme énergétique du fer ferreux (transcriptome Fe/S0) Analyse des substances exopolymériques extracellulaires Thiomonas sp. Etude de la physiologie de Thiomonas sp. Caractérisation des partenaires physiologiques de l’arsénite oxydase Etude de la régulation de l’opéron aox

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