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UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA. Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular. UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA. UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA. UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA. Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot Inmunocitoquímica

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UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

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Presentation Transcript

  1. UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA • Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

  2. UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA • Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot • Inmunocitoquímica • Inmunofluorescencia • Inmunoprecipitación • ELISA/EIA/RIA • Cromatografía de inmunoafinidad • Microscopia electrónica (morfología)

  3. Estructura de los anticuerpos

  4. Tipos de Anticuerpos

  5. Selección clonal: Delección

  6. Selección clonal: expansión

  7. Conceptos Conceptos • Inmunógeno, antígeno. • Carrier: BSA, KLH. • Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS. • Péptidos inmunogénicos • Proteínas nativas y desnaruralizadas. • Otras moléculas • Adjuvante de Freund: completo e incompleto. • Primera inmunización y recuerdos.

  8. Anticuerpos policlonales • Inmunización del conejo • Recuerdos • Extracción de sangre • Preparación del suero • Purificación del anticuerpo (métodos opcionales) • Caracterización del antisuero

  9. Anticuerpos policlonales

  10. Anticuerpos monoclonales • Inmunización del ratón • Extracción del bazo • Preparación de hibridomas (mieloma+B) • Selección de los clones • Producción y uso de anticuerpos

  11. Elección del tipo de anticuerpo

  12. Marcaje de Anticuerpos

  13. Marcaje de Anticuerpos para uso en Células

  14. Immunoblotting (western blot) Immunoblotting (western blot)

  15. Inmunocitoquímica Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.

  16. Inmunocitoquímica Localización de la “calbinding” (calbindina) en cerebelo de rata

  17. Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)

  18. Inmunoprecipitación

  19. Inmunoprecipitación

  20. ELISA

  21. ELISA

  22. Cromatografía de inmunoafinidad

  23. Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 mM.

  24. Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 mM.

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