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DNA-Hybridisierung

DNA-Hybridisierung. nach Sibley & Ahlquist. DNA. Biomolekül Träger der Erbinformationen Doppelhelix Adenin-Guanin Thymin-Cytosin nahverwandte Arten ähnliche DNA. Methode der DNA-Hybridisierung. 2x DNA Extrahierung und Reinigung 2x DNA Sequenzschaffung 2x „single-copy“-Bildung

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DNA-Hybridisierung

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Presentation Transcript

  1. DNA-Hybridisierung nach Sibley & Ahlquist

  2. DNA • Biomolekül • Träger der Erbinformationen • Doppelhelix • Adenin-Guanin • Thymin-Cytosin • nahverwandte Arten ähnliche DNA

  3. Methode der DNA-Hybridisierung • 2x DNA Extrahierung und Reinigung • 2x DNA Sequenzschaffung • 2x „single-copy“-Bildung • 2x DNA Markierung • Vermischung • Ermittlung der Schmelzpunkte

  4. DNA Extrahierung und Reinigung • DNA wird aus den Zellen entfernt • RNA-Moleküle und Proteine entfernt

  5. 2. DNA Sequenzschaffung • 500 Basenpaare • durch Enzyme

  6. 3. „single-copy“-Bildung • Erhitzung der Doppelstränge auf 95°C • Wasserstoffbrückenbindungen schmilzen

  7. 4. DNA Markierung • DNA wird radioaktiv gekennzeichnet • Iod als Markierung

  8. 5. Vermischung • beide Lösungen mit Sequenzen werden vermischt/ 1 zu 1000 • Abkühlung auf 50°C • einige Stunden Wartezeit

  9. 6. Ermittlung der Schmelzpunkte • Erhitzung auf 95°C • 2,5°C Schritte • Auswaschen bei jedem Schritt • Hydroxlapatit als „Sieb“

  10. 7. Schmelzpunkt • 50% Hybrid-DNA ausgewaschen => Schmelzpunkt • Parallelversuch nur mit einer DNA • Differenz der beiden Schmelzpunkte = ∆T50H-Wert

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