210 likes | 356 Views
A DNS „ujjlenyomat” vizsgálat. A munkacsoportok kémcsövei. Suspect 1 – 5 Tubes contain 10 µl of DNA sample. 70 µl Enzyme mix. 10 µl CS DNA. 0,24 g Agarose. 80 µl Loadingbuffer. 10 µl Marker. 1. A minták előkészítése. Figyelem !.
E N D
A DNS „ujjlenyomat” vizsgálat DNA-Fingerprint
A munkacsoportok kémcsövei DNA-Fingerprint
Suspect 1 – 5 Tubes contain 10 µl of DNA sample 70 µl Enzyme mix 10 µl CS DNA 0,24 g Agarose 80 µl Loadingbuffer 10 µl Marker DNA-Fingerprint
1. A minták előkészítése DNA-Fingerprint
Figyelem! • Minden pipettázáshoz használjunk új pipetta csúcsot a szennyeződés elkerülésére. • Mindegyik csövet zárjuk le és legkevesebb 30 mp-ig keverjük (rázzuk). • . DNA-Fingerprint
1. A DNS minták csövei CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl DNA-Fingerprint
1.1 Pipettázzunk 10 ul enzimkeveréket mindegyik csőbe CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Enzyme- 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl (ENZ) DNA-Fingerprint
2. A minták fermentálása Tegyük a csöveket a vízfürdő állványbaés inkubáljuk 20 percig 37 °C-os vízfürdőben. DNA-Fingerprint
3. Készítsük elő a gélelektroforézist DNA-Fingerprint
3.1 Készítsük el az elektroforézis kamrát Comb Metalrods Sledge Helyezzük bele a kamrába a szánt, a fém pálcákat(elektródákat) és a fésűt. DNA-Fingerprint
3.2Készítsük el a géleket (0,8%) • Adjunk 0,24 g agarózhoz + 30 ml TAE-puffert egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikba. • Melegítsük az Erlenmeyer lombikot rövid ideig a mikrohullámú sütőben, keverjük meg és melegítsük újra rövid ideig. DNA-Fingerprint
3.3 A kamra feltöltése a géllel Öntsük az 55 °C-os gélta géltartóba. Figyelem: • Ellenőrízzük a hőmérsékletet a kézfejünk hátával. • Ne mozgassuk a gélt amíg nem szilárdul meg. DNA-Fingerprint
3.4 Az elektroforéziskamra elkészítése • Miután a gél megszilár-dult , tegyük fel az elektroforéziskamra elektródáit. • Töltsük fel a kamrát 270 ml TAE-pufferrel, hogy elfedje a gélt. • Távolítsuk el a fésűt. DNA-Fingerprint
4. A DNS jelölő elkészítése • Pipettázzunk 10 µl töltő puffert (LB) intoa10 µl DNS-jelölőbe(M). DNA-Fingerprint
5.10 µl töltő puffer hozzáadás Pipettázzunk 10 –t a töltő pufferből a CS-be és az S1 –S5 csövekbe. 10 µl 10 µl 10 µl DNA-Fingerprint
6. A mélyedések feltöltése A bal sáv szabad Pipettázzunk 20 µl-tminden mintábólés 20 µl-t a DNSjelölőből (marker) (M) a résekbe. Emlékezz a sorrendre! Sávok:töltsd balról jobbra DNA-Fingerprint
6. A mélyedések feltöltése Figyelem: A géltasakot nem szabad átszúrni. DNA-Fingerprint
7. GélElektroforézis ( 120 V-talkb. 30 min) Állítsuk le az elektroforézist amikor a kék sáv a gél vége előtt 1 cm-nél tart. DNA-Fingerprint
8. A DNS festése • Helyezzük át a gélt a festő edénybe és fedjük fe 60 ml festő oldattal 2 percig. • Öntsük vissza a festő oldatot az Erlenmeyer lombikba. DNA-Fingerprint
CSS1S2S3S4S5 M 9. A gél kiértékelése Melyik gyanúsított az elkövető? DNA-Fingerprint
9. Eredmény DNA-Fingerprint