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Universidade Católica de Goiás Pró-Reitoria de Graduação Departamento de Biologia. MÉTODOS MOLECULARES NA ANÁLISE CROMOSSÔMICA. Cláudio C. Silva, M.Sc. Citogenética Molecular. FISH / ISHI / M-FISH SKY CGH. Hibridização “ in situ ” (Sondas de DNA). Cláudio C. Silva UCG/LaGene.
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Universidade Católica de GoiásPró-Reitoria de GraduaçãoDepartamento de Biologia MÉTODOS MOLECULARES NA ANÁLISE CROMOSSÔMICA Cláudio C. Silva, M.Sc.
Citogenética Molecular FISH / ISHI / M-FISH SKY CGH Hibridização “ in situ ” (Sondas de DNA) Cláudio C. Silva UCG/LaGene
Hibridização “in situ” Pardue e Gall (1969) Sondas radioativas Nederlof et al. (1989) Sondas não isotópicas (NISH) Bühler (1989) Sondas cromossômicas, centroméricas e teloméricas Hopman et al. (1992) Sondas de seqüências únicas Cláudio C. Silva UCG/LaGene
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization • Método Rápido; • Alta especificidade e confiabilidade; • Difícil otimização; • Equipamentos e material de consumo caros; FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
Blue Acqua Green Yellow Orange Red FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
Método Cultura Celular: • - Sangue periférico • - Medula Óssea • - Tumores sólidos, etc. FISH - Fluorescent “in situ” hybridization • Amostra Heparinizada • Meio RPMI • Glutamina • Soro Fetal Bovino • Fitohemaglutinina FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Sondas para DNA repetitivo Sondas para seqüência única Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Pancentromérica Telomérica Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization rRNA (NOR) Seqüências repetitivas Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Seqüências específicas Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization WCP – Whole Chromosome Probe (Sonda para cromossomo inteiro) Cláudio C. Silva UCG/LaGene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ”
Sexo Masculino 47,XY,+21 Sexo Feminino 47,XX,+21 FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
49,XXXXY FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
Cromossomos inteiros Lócus FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
Pancentromérica XY,18 Whole Chromosome Probe 22 FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
DAPI - Vysis® / WCP 1 - Vysis® / WCP 2 - Vysis® / WCP 4 - Vysis® FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
FISH - Fluorescent “in situ” hybridization Cromossomo 17 HER2/neu Gene FISH - Hibridização Fluorescente “in situ” Cláudio C. Silva UCG/LaGene
Considerações Finais • Revolução a análise citogenética; • Permite a identificação de microdeleções, translocações, amplificações gênicas, etc; • Interage com o mapeamento gênico; • Possibilita a confirmação do diagnóstico; • Permite uma melhor compreensão de eventos moleculares; Cláudio C. Silva UCG/LaGene