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Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza humains et animaux. Jean-Christophe Le Bayon. VirPath CNRS FRE 3011 Dr Manuel Rosa-Calatrava Pr Bruno Lina.
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Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza humains et animaux. Jean-Christophe Le Bayon • VirPath • CNRSFRE 3011 Dr Manuel Rosa-Calatrava Pr Bruno Lina Master 2 GBC – 29-30 Juin 2009 UCBL ED341 –E2M2
hPIV2 et NDV Famille : Paramyxoviridae Genre : Rubulavirus Avulavirus • Maladies respiratoires • Pas de vaccins/antiviraux • Virus enveloppé Ø 200nm • ARN négatif, simple brin Terrier et al. (2008) L’entrée dans la cellule est possible grâce aux GP F et HN
Membrane Fusion Cellular membrane N C F2 S Fusion peptide S HR1 HN F Extracellular domain F1 HR2 Transmembrane region Cytoplasmic tail N C F HN Takimotoet al. (2002) Viral envelope
Objectives • hPIV-2 variants with increased cell-cell fusion: • T96Amutation (Terrier et al., 2008) • PIV-5 “HN-independent” F : • L22P, K132Eand V290A(Ito et al., 1998, 2009) • PIV5 / hPIV2 F sequences: 51% identity Functional characterization of F GP hPIV2 mutants : T96A and mutations transposed from PIV-5 Role in fusion and HN-F activation mechanisms ?
Conclusion • T96A: favorise l’activation par HN • I24P: F “indépendante” de HN • K133E: interaction entre F et HN et augmentation de la fusion • I294A: favorise l’activation par HN T96A K133E Tête I24P I294A Tige • 2 parties distinctes de la tête de F semblent être impliquées dans l’interaction F-HN
Projet de thèse • Expression de glycoprotéines (WB, FACS) • Interactions entre F et HN(CoIP) • Comportement des mutants dans un contexte viral ou pseudo-viral (VLP and Reverse Genetics) • Meilleure mesure de la fusion membranaire (RT lipid-mix assay) • Caractérisation de nouveaux mutants grâce à des variants(sequencing, fusion assay)
Contribution scientifique du projet Comprendre le mécanisme d’entrée du virus dans la cellule → Design de nouvelles molécules anti-virales
Acknowledgments Dr Olivier Terrier Dr Manuel Rosa-Calatrava Pr Bruno Lina Christelle Godard and GaëlleCartetfor their technical support All VirPath team for their support