1 / 11

PERPUSTAKAAN GENOM (GENOMIC LIBRARY)

PERPUSTAKAAN GENOM (GENOMIC LIBRARY). PERPUSTAKAAN GENOM = PERPUSTAKAAN GEN YANG DIBUAT DARI DNA GENOMIK PERPUSTAKAAN GEN = KOLEKSI BERBAGAI SEKUENS DNA DARI SUATU ORGANISME YANG MASING-MASING TELAH DIKLON KE DALAM SUATU VEKTOR UNTUK MEMUDAHKAN PENYIMPANAN, PEMURNIAN, DAN ANALISIS.

lynnea
Download Presentation

PERPUSTAKAAN GENOM (GENOMIC LIBRARY)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. PERPUSTAKAAN GENOM(GENOMIC LIBRARY) • PERPUSTAKAAN GENOM = PERPUSTAKAAN GEN YANG DIBUAT DARI DNA GENOMIK • PERPUSTAKAAN GEN = KOLEKSI BERBAGAI SEKUENS DNA DARI SUATU ORGANISME YANG MASING-MASING TELAH DIKLON KE DALAM SUATU VEKTOR UNTUK MEMUDAHKAN PENYIMPANAN, PEMURNIAN, DAN ANALISIS

  2. PERPUSTAKAAN cDNA • PERPUSTAKAAN cDNA = PERPUSTAKAAN GEN YANG DIBUAT DARI DNA HASIL TRANSKRIPSI BALIK mRNA • TIDAK MENGANDUNG SEKUENS GENOMIK NONTRANSKRIPSI

  3. BESARNYA PERPUSTAKAAN GENOM N = ln(1 - P)/ln(1-f) N = BANYAKNYA REKOMBINAN YANG HARUS ADA DI DALAM PERPUSTAKAAN GENOM P = PELUANG YANG DIINGINKAN f = NISBAH PANJANG FRAGMEN SISIPAN (INSERT) TERHADAP PANJANG GENOM

  4. CONTOH PENGUKURAN BESARNYA PERPUSTAKAAN GENOM UNTUK MENDAPATKAN FRAGMEN SISIPAN SEBESAR 20 kb (2 X 104 pb) DENGAN PELUANG 99% DIPERLUKAN PERPUSTAKAAN GENOM SEBESAR : • N = ln(1-0,99)/ln1- (2 x 104/4,6 x 106) = 1,1 x 103 (pada E.coli yang panjang genomnya 4,6 x 106 pb) • N = ln(1-0,99)/ln1- (2 x 104/3 x 109) = 6,9 x 105 (pada manusiayang panjang genomnya 3 x 109 pb)

  5. SKEMA PEMBUATAN PERPUSTAKAAN GENOM restriksi restriksi ligasi

  6. transformasi ? sel inang nontransforman sel inang dengan DNA vektor sel inang dengan DNA rekombinan

  7. PROSEDUR SKRINING UJI FENOTIPE (UNTUK MEMILIH KLON YANG MENGANDUNG DNA REKOMBINAN) • RESISTENSI TERHADAP ANTIBIOTIK • EKSPRESI GEN LAC Z HIBRIDISASI (UNTUK MEMILIH DNA REKOMBINAN DENGAN FRAGMEN SISIPAN YANG DIINGINKAN) • HIBRIDISASI KOLONI • SOUTHERN BLOTTING • NORTHTERN BLOTTING • DOT BLOTTING

  8. UJI RESISTENSI TERHADAP ANTIBIOTIK ampR tetR TETRASIKLIN tetR insert sel inang AMPISILIN

  9. UJI EKSPRESI GEN LAC Z lac z insert X-GAL/IPTG sel inang

  10. HIBRIDISASI KOLONI • transfer ke • membran nilon • SDS, protease • NaOH • fiksasi • pilih klon positif • rendam dalam • larutan probe • cuci, autoradiografi

  11. SOUTHERN /NORTHERN BLOTTING • transfer ke • membran nilon • (denaturasi) • fiksasi • rendam dalam • larutan probe • cuci, autoradiografi

More Related