Técnicas diagnosticas en hematología

1. Técnicas diagnosticas en hematología Pr Marc Maynadié

2. Desde 2000 la clasificación de las enfermedades hematológicas se hace según varios elementos : • Tipo celular : mieloide, linfoide B, T, NK • El nivel de diferenciación • La arquitectura de la invasión : nodular o difuso • Las anomalías citogenéticas • El perfil molecular

3. En Hematología, el diagnostico es multifactorial • Morfología : • citología : células • y/o histología : arquitectura • Immunofenotypo : • Immunohistochimica • Citometria de flujo • Cariotipo : formula cromosómica • Biología molecular : mutación, amplificación, deleción • Congelación : colección de tejido maligno

4. Técnicas de base en Hematología: • Citología : • Leucemia agudas • Síndromes mielodisplasicos • Síndromes mieloproliferativos • Algunas proliferaciones linfoides • Histología : • Todas las proliferaciones linfoides en tejidos solidos • Síndromes mieloproliferativos

5. LLC LCM Sangre LMA LLA

6. LAM SMD Medula osea LCM LLA

7. Infiltración difusa Infiltración nodular

8. Immunofenotipaje • Immunohistochimica: anticuerpos monoclonales que se usan en laminas. La fijación se revela con una reacción enzimática • Citometria de flujo : anticuerpos monoclonales con molécula fluorescente, se usan en células en suspensión. Cada célula analizada individualmente a gran velocidad.

9. ImmunoHistochimica

10. Citometria de flujo Células en suspensión 10 colores

15. Populacion linfoide B monoclonale

16. Leucemia aguda

17. Leucemia mieloide aguda

18. Leucemia linfoide aguda

19. Fenotipo : • mieloide, • Linfoide B, T o NK • clonalidad • Nivel de diferenciación : células inmaduras o maduras • Marcadores de pronostico : CD34, … • Minoración del numero de células malignas • Enfermedad residual

20. Cariotipo convencional : técnicas de bandas R o G Formula chromosomica : 46, XX

21. Hibridación in situ fluorescente( FISH) : sondas especificas de unas parte de cromosomas Multi FISH FISH multibandas Hybridaciongenomica comparativa (CGH)

23. Cyanine 5 : jaune - Aqua : bleu -Cyanine 3 : violet -FITC : vert-Texas Red : rouge - MultiFISH métaphase normale Multifish

24. Leucemia linfoide aguda Chromosome 1 der1 der 19

25. Principio de la CGH

26. Zonas amplificadas

27. Biología molecular Polymerase Chain reaction : PCR diferentes tipos : - Reverse Transcriptase - Real Time - nested pCR…

28. ADN Chip o microarray miniaturisacion de tecnicas de hybridacion ADN patiente ADN normal Loci a estudiar Trisomia en rojo Monosomia en verde

29. Vert : gène sous exprimé Rouge : gène surexprimé

30. 1500 ADNc del X ADNc H : verde ADNcM : rojo Amarillo : equivalente genico ADN Chip ADNc celular : rojo ADNc de referencia : verde cluster de genes con expresión génica aumentada : rojo

31. Congelación de tejido maligno • Interés mayor • Importante para el diagnostico a posteriori : colección sanitaria • Muy importante par la búsqueda : fundamental, clínica y epidemiológica • Tiene que ser automática y sistemática

32. Gracias por su atencion