1 / 29

Danica Matišić

Danica Matišić. KVALITATIVNO I KVANTITATIVNO ODREĐIVANJE MONOKLONSKOG PROTEINA U MM I SRODNIM POREMEĆAJIMA – kako koristiti metode i interpretirati nalaze. DIJAGNOZA MULTIPLOG MIJELOMA OSNIVA SE NA NALAZU KLASIČNOG TRIJASA:. NALAZU MONOKLONSKOG IMUNOGLOBULINA U SERUMU I/ILI URINU

merle
Download Presentation

Danica Matišić

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Danica Matišić KVALITATIVNO I KVANTITATIVNO ODREĐIVANJE MONOKLONSKOG PROTEINA U MM I SRODNIM POREMEĆAJIMA – kako koristiti metode i interpretirati nalaze

  2. DIJAGNOZA MULTIPLOG MIJELOMA OSNIVA SE NA NALAZU KLASIČNOG TRIJASA: • NALAZU MONOKLONSKOG IMUNOGLOBULINA U SERUMU I/ILI URINU • INFILTRACIJE KOŠTANE SRŽI PLAZMA STANICAMA (>10%) • OSTEOLITIČKIH ŽARIŠTA IMUNOKEMIJSKU METODU ZA ODREĐIVANJE RAZREDA I TIPA MONOKLONSKOG IMUNOGLOBULINA, PRVI PUT OPISALI SU GRABAR I WILLIAMS 1953.GOD.

  3. LABORATORIJSKA EVALUACIJA MONOKLONSKOG PROTEINA Robert A, Kyle, David F. Keren,Raymond Alexanian,Usha Kallemuchikkal 1. Elektroforeza proteina u serumu i urinu: • nisko rezolutne elektroforeze • visoko rezolutne elektroforeze 2. Kvantitativno određivanje imunoglobulina • Nefelometrijski ili turbidimetrijski • Radijalna imunodifuzija 3. Definiranje razreda i tipa monoklonskog imunoglobulina • Imunofiksacija • Imunoelektroforeza • Imunoselekcija • Imunosupstrakcija: moguća samo uz kapilarnu elektroforezu 4. Kvantitativno određivanje monoklonske komponente • Denzitometrijski 5. Kontrola kvalitete evaluacije monoklonskog proteina Ključna komponenta interne kontrole: direktan kontakt biokemičara s kliničarem o slučaju koji je neuobičajene prirode ili ako postoji bilo koja diskrepansa u nalazu

  4. Elektroforeza serumskih proteina Vizualni pregled Klinička sumnja ili prisutnost monoklonske vrpce Bez promjena Elektroforeza serum. prot. Bence Jones protein? Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza Proteinogram Elektroforeza proteina u mokraći (100 x ukonc. uzorak) Definicija M-P (određ. razreda i tipa) Denzitometrijska kvantifikacija M-P Negativ. nalaz Prisutan BJ protein Imunofiksacija Imunofiksacija i/iliimunoelektroforeza Opisni nalaz + klinička informacija daju tumačenje nalaza Imunoelektroforeza NACIONALNA GRUPA ZA LIJEČENJE HEMATOLOŠKIH BOLESTI Pododbor za laboratorijsku hematologiju i morfologiju IMUNOKEMIJA: D. Matišić, V. Preden-Kereković DIJAGNOSTIČKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU MONOKLONSKOG PROTEINA (M-P)

  5. Elektroforeza serumskih proteina može se izvesti nisko i visoko rezolucijskim tehnikama: 1. Elektroforeza proteina u serumu i mokraći indicirana je za svakog bolesnika kod kojeg postoji sumnja na poremećaj plazma stanica. Nisko rezolucijske elektroforeze:elektroforeza na acetat-celulozi ili agarozi: razdvaja proteine na pet frakcija. Kod ove tehnike nije moguće postići dobro razdvajanje β1-(transferin) i β2-globulinske frakcije (C3) Visoko rezolucijske elektroforeze:kapilarna zonska elektroforeza omogućuje bolje razdvajanje transferina i C3 u  području kao i bolje uočavanje niskih koncentracija M-proteina koji mogu putovati od 2 do gama područja

  6. NISKO REZOLUCIJSKA ELEKTROFOREZA SERUMSKIH PROTEINA 1.Procjena približne koncentracije glavnih serumskih proteina: alb, alfa-1-AT,Hp, alfa-2-M, C3, Tf, IgA i IgG 2.Detekcija monoklonskog proteina 3.Osjetljivost detekcije monoklonskog proteina je 2 g/L na acetat-celulozi i 1 g/L na agarozi

  7. VISOKO REZOLUCIJSKA ELEKTROFOREZA SERUMSKIH PROTEINA – KAPILARNA ZONSKA ELEKTROFOREZA + -- - Visoki stupanj rezolucije posljedica je više faktora: • primjena visokih napona (od 3-30 kV) • kontrola temperature • kontrola debljine sloja gela i • sama aplikacija uzorka

  8. Visoko rezolucijski sustavi omogućuju razdvajanje proteina na 10 do 12 frakcija: prealbumin, albumin, -lipoprotein, α1-kiseli glikoprotein (orozomukoid), α1-antitripsin, α2- makroglobulin, haptoglobin, transferin, -lipoprotein, C3, fibrinogen, CRP (kad je značajno povišen) i -globulini koje uglavnom predstavlja IgG.

  9. Primjer CZE Figure 1. Electropherograms of a sample with an IgM monoclonal protein. (A), agarose electrophoresis (Hydragel 15 HR) on the Hydrasys system (Sebia); (B), capillary zone electrophoresis (Paragon 2000; Beckman-Coulter); (C), agarose electrophoresis (Hydragel 15 HR) on the Hydrasys system (Sebia) after mercaptoethanol treatment (10 µL of 1:10 dilution of mercaptoethanol added to 100 µL of serum). The fractions in panels A and C are albumin, 1-antitrypsin, -lipoprotein, 2-macroglobulin and haptoglobin, ß-lipoprotein, transferrin, C3, and the -globulin fraction. The small deflectionin the mid-gamma region is an artifact. The arrow indicates the monoclonal protein.

  10. Vizualni pregled elektroforeze Klinička sumnja ili prisutnost monoklonske vrpce Bez promjena Hp-Hb CRP Hb Opisni nalaz + klinička informacija daju tumačenje nalaza Imunoelektroforeza i/ili imunofiksacija ili imunosupstrakcija

  11. 2.Za definiranje razreda i tipa M-proteina indicirana je imunoelektroforeza i/ili imunofiksacija ili imunosupstrakcija koja je moguća samo uz kapilarnu zonsku elektroforezu anoda + katoda - Heidelberger-Kendallova krivulja

  12. -iako je nalaz elektroforeze negativan kod suspektnih bolesnika treba naparaviti IF (IgD, IgE)) -imunofiksacija nije indicirana ako se ustvrdi poliklonska hipergamaglobulinemija IMUNOELEKTROFOREZA IMUNOFIKSACIJA

  13. Metoda imunosupstrakcije

  14. Imunoselekcija je imunokemijska tehnika kojom se mogu dokazati monoklonski sintetizirani teški lanci. • U gelu agara, u koji su prethodno dodani antiserumi na vezane lake lance kapa i lambda tipa, elektroforetski se razdvoje proteini u serumu. Pri tom razdvajanju, dolazi do vezanja kompletnih molekula imunoglobulina, dok eventualno prisutni monoklonski slobodni teški lanci ostaju nevezani. • U slijedećem koraku izvodi se imunokemijska reakcija precipitacije slobodnih teških lanaca sa specifičnim antiserumom na γ (G), α (A) ili μ (M)teške lance.

  15. 3.M-protein je potrebno pratiti denzitometrijski ali IF nije potrebno ponavljati ako se nisudogodile promjene u migraciji M-proteina ili ako se nije pojavila nova vrpca 2. Nefelometrijski izmjereni Ig: G = 26,3 g/L A = 0,43 g/l M = 0,35g/L Denzitometrijski izmjereni: IgG = 29,4 g/L κ=8,16g/L λ=0,57g/L κ/λ=14,3 (κ=1,7-3,7; λ= 0,90-2,10 κ/λ= 1,35-2,65) 1 1 1 2 3 Alb M-prot. 2 3 2. Nefelometrijski izmjereni Ig: G = 4,6 g/L A = 14,9 g/L M = 0,62 g/L Denzitometrijski izmjereni IgA = 19,1 g/L

  16. 4. Za sve bolesnike s poremećajem plazma stanica potrebno je nefelometrijsko ili turbidimetrijsko određivanje Ig da bi se ustvrdila koncentracija ostalih neuključenih Ig Nefelometrijski određeni Ig: G=3,70 g/L A=43,4 g/L M=0,16g/L Denzitometrijski određen: IgA=36,7g/L 4 4.Nefelometrijski izmjereni Ig: G = 22,74 g/L A = 0,14 g/l M = 0,10 g/L Denzitometrijski izmjer. G = 21,4 g/L 4

  17. 5.Kod bolesnika s multiplim mijelomom, Waldenström makroglobulinemijom i amiloidozom potrebno je pratitipromjene u koncentraciji M-proteina svakih 1-2 mj.;dok je kod MGNZdovoljno je:1x u godini G = 16,3 g/L G = 26,3 g/L G = 12,3 g/L

  18. 6. Hiperviskozni sindrom traži zamjenu plazme s indikacijama utemeljenim na kliničkim značajkama(viskozitet i elektroforezu seruma treba napraviti prije nego se plazma zamijeni,radi usporedbe koncentracija M-proteina)Primjer elektroforeze bolesnika sWaldenström m.prije (A) i poslije (B) plazmafereze: A B

  19. 7.Krioglobuline treba napraviti u svih bolesnika s M-proteinom koji pokazuju osjetljivost na hladnoću, posebno kod onih sa M-IgM.

  20. ključna komponenta interne laboratorijske kontrole je izravan kontakt biokemičarai kliničara o slučaju koji je neuobičajene prirode ili ako postoji bilo kakav nesklad u nalazu. 8. Kontrola kvalitete laboratorijske evaluacije M-proteina:

  21. Bence-Jones protein 9. Svim bolesnicima s multiplim mijelomom, Waldenström makroglobulinemijom, amiloidozom i srodnim bolestima potrebno je odrediti prisutnost i dnevno izlučivanje BJP (IF:najmanje 100x ukoncentriranog urina) Monoklonski slobodni lagani lanci imunoglobulina, Bence-Jones proteini, (BJP),suhomogenapopulacija,kapa (κ) ililambda (λ) tipa, lakihlanacaimunoglobulinakojestvaramaligniklonB-stanica.

  22. Sinteza i metabolizam lakih lanaca

  23. Bence-Jones protein Elektroforeza proteina u mokraći (najmanje 100x ukonc. uzorak) Prisutan protein BJ Negativ.nalaz: ako na elektroforetskoj slici 100x ugušćenog urina ne nalazimo nikakvu suspektnu monoklonsku vrpcu Preporuka je: koristiti 24 satni urin

  24. Identifikacija BJP imunofiksacijom ili imunoelektroforezom Elf.prot. u serumu Elf.prot. u urinu IE

  25. Serum Free Light Chain Assay in Diagnosis and Monitoring of Multiple Myeloma D.E. Smith, A.R. Bradwell, G.P. Mead, H.D. Carr-Smith Article Archives: 2005, Volume 16, Number 1 Introduction A distinguishing feature of the monoclonal gammopathies is the production of homogeneous populations of immunoglobulins by malignant clones of B-cells. Production of free light chains (FLCs) is an important feature of light chain diseases, such as light-chain myeloma (LCMM), primary systemic (AL) amyloidosis, and light-chain deposition disease (LCDD). However, in a retrospective study of 745 archived samples from patients with plasma cell disorders, 91% had abnormal FLC levels, and 97% had either elevated FLC levels or an abnormal ratio (see Table 1)[1-3]. Among those patients with intact immunoglobulin myeloma, 96% were found to have either elevated FLC levels or an abnormal ratio. Referentni intervali za slobodne lake lance u serumu:

  26. FREELITE™ Serum Free Light Chain Assays

  27. FREELITE™ Serum Free Light Chain Assays

  28. B: koncentracija lakih lanaca u serumu kod zdravihispitanika,bolesnika saNSMM i MMLL kapa i lambda tipa A B Osjetljivost SPE Osjetljivost IF A: koncentracija lakih lanaca u serumu kod zdravihispitanika,bubrežnih bolesnika i bolesnika sa MMLL kapa i lambda tipa

  29. Kristali Bence-Jones proteinaRazumijevanje strukture kristala BJP moglo bi biti ključno za razvoj selektivne terapije lijekovima. Microgravity Space is the laboratory of the next millennium Mikrogravitacijski uvjeti u svemiru su jedinstveni okoliš za istraživanja koja vode novim produktima i tehnologijama. STS-95 STS-80

More Related