Pesquisa experimental na pós-graduação

1. Pesquisa experimental na pós-graduação Maria Carolina Guido

2. Pesquisa experimental “É o conjunto de procedimentos sistemáticos em animais, baseados no raciocínio lógico, que tem por objetivo encontrar soluções para problemas propostos, mediante a utilização de métodos científicos que normalmente não são reprodutíveis em seres humanos”. Aplicação de uma Metodologia Científica adequada Obtenção de soluções, dados, parâmetros e respostas Dúvida, problema, questões sem solução, dados importantes para a Ciência  

3. Histórico • Aristóteles (384 - 322 ac)  início de dissecção em diferentes animais • Erasistratus (304 – 258 ac)  experimentação com animais vivos • traquéia = tubo aéreo • pulmões = órgãos pneumáticos • Época medieval  proibição pelas autoridades eclesiásticas

4. Novo marco experimental • Andreas Vesalius (1500)  anatomia X fisiologia  vivissecção

5. Início da pesquisa experimental • França (1800): primeiro centro experimental biológico e médico

6. Delineamento do experimento • Definição da variável a ser estudada e a forma como deve ser mensurada • Especificação do tipo de estudo • in vivo, in vitro, ex vivo • in vivo: tipo de animal • Determinação dos grupos experimentais •  grupo controle • grupo sham • grupo experimento • grupo cego • Tipo de tratamento a ser efetuado (?) • Grupo piloto X grupo experimental

7. Características da pesquisa experimental • Pesquisa que não pode ser desenvolvida em pacientes • Proximidade com o modelo humano • Baixa variabilidade dos resultados • Uniformidade estatística • Reprodutibilidade dos resultados

8. ANIMAIS EXPERIMENTAIS

9. Camundongos • Origemcamundongo selvagem (Mus musculus) • Geneticistaslinhagens isogênicas e heterogênicas • (Mus domesticus) • Pesomacho 20-40g e fêmeas 18-35g • Longevidade1-4 anos • Dieta universalcomida: 5,0g/dia • água: 6,7 mL/dia • Pequeno tamanho os tornam extremamente suscetíveis às alterações das condições ambientais (2 a 3ºC)

10. Utilização em laboratórios • Tamanho pequeno, fácil de manusear, baixo custo de manutenção, economia de espaço • Tempo de vida curto  modelo útil para estudos relacionados com idade e toxicologia crônica • Alterações genéticas favoráveis (Knock-out) • Utilização experimental • imunologia (rejeição ou não de transplantes de tecidos) • fisiologia e bioquímica (elucidação de processos fisiológicos e bioquímicos) • estudos comportamentais • microbiologia •  teratologia •  avaliação da segurança e eficácia de produtos farmacêuticos

11. Exemplos de algumas linhagens • Balb/c • Baixa incidência de tumores mamários • Suscetíveis à pneumonia crônica • Suscetíveis à radiação • Usados para produção de anticorpos monoclonais • C57BL/6 • Podem apresentar hidrocefalia • Amplamente utilizados como linhagem padrão para manutenção de muitas mutações • Resistentes à radiação • Suscetíveis à inoculação do bacilo da tuberculose • DBA/2 • Apresentam deficiência de vitamina K • Resistentes à infecções de Plasmodium e Leihmania

12. Ratos • Origemrato Norway marrom  Rattus norvegicus • Primeira espécie de mamíferos a ser usada sistemicamente para propósitos científicos (efeito da adrenalina em ratos albinos – França, 1856) • Pesomacho 300-400g e fêmeas 250-300g • Longevidade4 anos • Dieta universalcomida: 100g/dia • água: 80 a 110 mL/dia • Manipulaçãoinício da manhã (digestão)

13. Grande adaptabilidade  modelo adequado para uma variedade de diferentes tipos de pesquisa • Utilização experimental • endocrinologia • bioquímica • farmacologia • toxicologia •  fisiologia experimental • teratologia • Alta tolerância à carência de constituintes de ração  nutrição • neurofisiologia • oncologia • imunologia • imunogenética • parasitologia • Utilização em laboratórios

14. Exemplos de algumas linhagens • Wistar e Sprague-Dawley albino • Animais gentis e facilmente manipuláveis • SHR • Incidência alta de hipertensão (200mmHg), sem lesões nos rins ou glândulas adrenais • Lewis albino • Alta fertilidade • Elevado nível de tiroxina, insulina e hormônio do crescimento • Tornam-se obesos com dieta rica em gordura • Desenvolvem miocardite • F344 • Alta incidência de tumores mamários e de adenomas da pituitárias

15. Hamster • OrigemSírio (Mesocricetus auratus) • Chinês (Cricetulus griseus) • Europeu (Cricetus cricetus) • Pesomacho 85-130g e fêmeas 95-150g • Longevidade3 anos • Dieta universal comida: 10-12g/dia • água: 8-10 mL/dia

16. Utilização em laboratórios • Características imunogenéticas que os tornam tolerantes a tumores, parasitas, vírus e bactérias • A presença da bolsa na bochechas tornou-se útil para permitir transplantes de tumores (crescimento livre e simetricamente) • Estudos de disfunção endócrina e estudos parasitológicos • Pesquisa dentária (dente molar é semelhante ao humano)

17. Chinês: alta incidência de Diabetis mellitus • Baixo nº cromossômico (22): estudos citológicos (genética, cultura de tecido e radiação) • Radioresistentes • É o modelo mais seguro para estudo dos efeitos carcinógenos químicos nos rins e nas bexigas • Tolerantes a lavagens pulmonares (estudo de inalação) • Teratologia (curto período de gestação)

18. Cães • OrigemCanis familiares (Beage, Corgi, Boxer, Labrador e cães de rua)  Centros de controle de zoonoses • Condições especiais devem ser consideradas  desnutrição, desidratados, ecto e endoparasitoses e doenças infecto-contagiosas • Utilização experimental • Grande semelhança aos seres humanos • Choque hemorrágico • Técnicas e treinamento de transplantes e microcirurgias • Eutanásia deve ser realizada da maneira mais humana possível (pentoparbital sódico, tiro com arma de fogo e eletrocução)

19. Preços de animais • Camundongo BALB/c (8 semanas) – US$ 12.00 • Rato Wistar (60 dias) – US$ 20.00 • Camundongo transgênico (4 semanas) – US$ 29.00

20. 378 1% 14729 - 46% 12231 – 39% 2224 -1% 186 – 1% 2008 – 6% Porcentagem de animais cedidos a alunos de pós-graduação – FMUSP 1998

21. Produção mensal de ratos Wistar FMUSP 1998 Fornecimento total: 12.231