Lab: Serología Hospital Severo Ochoa

1. Lab: Serología Hospital Severo Ochoa CONCEPCION BELLIDO MARTIN 2º LDC

2. Técnicas de diagnóstico serológico • AGLUTINACIÓN---- RPR--reagina plasmatica rapida BRUCELLA-- Rosa de. Bengala • ELISA------------------- E.de ChagasTripanosomas cruzi • INMUNOFLORESCENCIA—LEISMANIA-- Leismaniosis BORDETELA PERTUSI -- tosferina PARVOVIRUS B 19-- detección ac IgG,IgM • INMUNOGROMATOGRAFÍA—VIRUS de Epstein Baar (Mononuclosis infecciosa) HP( Helicobaster Pyroli) • HEMAGLUTINACIÓN---PTHA--prueba de aglutinación de Treponema palldun QH-----quiste hidatilico • WESTEM BLOT---VIH confirmación • CENTAURO,este aparato hace difirentes tecnicas:ac y ag de VHB,C,D,VHA Mononucleosis, Rubeola,Toxoplasmosis y Cargas Virales.

3. RPR Reagina plasmatica rapida NEGATIVO Tecnica para la detección cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos de la sífilis en suero o plasma humano por aglutinación. La RPR es una prueba no treponemica por que los an ticuerpos que detecta no son especificos del T pallidum, aunque la presencia de los anticuerpos que detecta en el suero o plasma esta fuertemente asociada con la in fección de ese organismo. Este tipo de prueba mide ac(IgG y IgM) producidos como respuestaal material lipoideo liberado de células anfitrionas dañadas,asi como material tipo lipoproteina liberado por las espiroquetas. La tecnica usa partículas de carbono recubiertas con una mezcla de aníigenos lipídos que se combinan con el anticuerpo presente en el suero o plasma las partícu las se suspenden en un medio que contiene componen tes para eliminar reacciones no específicas.Las reac cíones positivas se muestran mediante el agregado macroscópico de las partículas. POSITIVO

4. ELISA T.Inmunoensayo enzimático E. de Chagas Test de ELISA para la detección de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi en suero o plasma. Enfermedad cronica parasitaria tambien puede ser con genita o por transfusión de sangre o trasplantes de orga nos. . Metodo inmunoenzimatico en el que se recubren pocillos de una placa de microtitulación con antigenos de T. cruzi a los pocillos se les añade las muestras a analizar si en es- ta hay anticuerpos especificos frente aT.cruzi se formara un complejo estable con el antígeno que recubre el pocillo despues se lava y extrae el material no unido se añaden IgG de conejo anti-IgGy anti-IgM humanas marcadas con perosidasa y, si el complejo An/Ag enzimatico y cromóge no. Esta solución desarrollara un color azul si la muestra es positiva,este cambia a amarillo despues de parar la rea ción con acido sulfúrico.La intensidad del color es propor cional a la concentración de anticuerpos anti-T.cruzi los po cillos que contengan muestras negativas no desarrollaran color.

5. Tecnica de inmunofluorescencia Las leishmaniosis son un grupo de enfermedades parasitarías provocada por un protozoo flajelado perteneciente al género Leishmania Para hacer esta técnica hay que atemperar los los reactivos y marcar los portas, Las inmunoglobulinas séricas humanas anti-leishmania Infantun presentesen la muestra se fijan a los parásitos depositados sobre los portas, los elementos no fijados son eliminados con los lavados. Las inmunoglobulinas se revelan por las inmunoglobuli nas de cabra anti-inmunoglobulina humanas marcadas con fluorescencia.Los elementos no fijados son elimina dos con los lavados La lectura de resultados se hace con un microscopio de epifluorescencia.

6. Tecnica de inmunocromatocrafia Mononucleosis infecciosa La mononucleosis infecciosa enfermedad autolimitante causada por el virus de Epstein Barr,aparece más fre cuentemente en paises desarrollados entre adoescen tes de los 14 a los 18 años. . Esta técnica detecta los anticuerpos IgM en suero y plas ma o sangre entera, en esta técnica se utiliza un extracto de eritrocitos de bovino.En el pocillo de muestra hay una membrana cubierta con microesferas de latex conjugadas a anti-cuerpos de cabra anti-IgM en la segunda fase (ven tana de resultados)hay dos agentes inmovilizados las es feras de latex y los eritrocitos de bovino, en la tercera fa se hay un agente capaz de unirse al complejo de anticuer pos -latex . se pone la muestra en el pocillo se añade el rebelador el liquido pasa por capilaridad se une al anticuerpo -latex y se desplaza hasta la zona con los eritrocitos de bovino Ag inmobilizado si los anticuerpos anti-MI estan presentes en la muestra se forma un sandwich de fase solida /anticuer po anti-MI/anticuerpo latex esto hace que aparecan dos li neas verticales si el resultado es positivo y una linea si el resultado es negativo.

7. Tecnica de Biología Molecular • B. MOLECULAR---DNA--- VHB RNA---VHC genotipo RNA—VIH PCR --T.real RNA En mi rotación por el departamento de serología me comentaron que se hacian las técnicas antes expuestas pero no tuve la oportunidad de ver nin guna por eso no las expongo. VHB

8. PTHA -T. de hemaglutinación Test de hemaglutinación pasiva para la detección de anticuerpos especificos anti-Treponema palli dum en suero o plasma humano. Los hematies de pollo estabilizados se sensibili zan con un extracto antigénico de Treponema pa llidun (cepa Nichols). Estos hematies aglutinarán con los anticuerpos específicos presentes en el suero o plasma de pacientes afectados por sífilis. Las reacciones no especifícas se detectan con el reactivo control no sensibilizado. Los anticuerpos del grupo Treponema no especiíi cos no especificos de la sífilis se absorben con un extracto de Treponema Reiter. NEGATIVOS POSITIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVO

9. Westerm Blot Los virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y tipo 2 (VIH-l y VIH-2) han sido claramente identificados como la causa principal del sindrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). La técnica "western blot" , es una de las más ampliamente utilizadas para confirmar resultados positivos en las pruebas de depistaje de Ac VIH, ya que permite una discriminación puntual de las especificidades de reactividad de anticuerpos frente a las distintas proteínas del virus. Las tiras de nitrocelulosa en las que se han transferido las proteínas del virus contienen, generalmente, casi todas las proteínas estructurales del VIH, algunas proteinas precursoras de aquellas, y además otros antígenos celulares contaminantes que proceden de las células infectadas empleadas para la obtención del Ag vírico . Algunas tiras de WB comercializadas para VIH- 1 incluyen, además, algún péptido sintético, correspondiente a glicoproteínas específicas de VIH-2, a efectos de identificación de la infección VIH con una sola tira de reactivo. La técnica de WB consiste, básicamente, en la incubación de una de esas tiras con el suero problema durante un tiempo que oscila entre 2 a 4 horas hasta 18 horas, tras lo cual se revela la presencia de anticuerpos frente a las diferentes proteinas del virus mediante reacciones inmunoenzimáticas de distinta configuración dependiendo del fabricante. El resultado es la aparición de bandas coloreadas de mayor o menor intensidad, en el lugar de la tira de nitrocelulosa en el que están situadas las proteinas del VIH contra las cuales existen anticuerpos en el suero problema.

10. Centauro Este aparato,llamado Centauro 2000 es el encar gado de hacer muchas de las técnicas que se hacen en la sección de serología lo unico que ne cesita es un Tecnico especialista de laboratorio que le programe todos los dias y atienda sus necesi dades de H2O, calibradores, cubetas,puntas y con troles, ya, comienza a trabajar haciendo técnicas como: Rubeola, toxoplasmosis,VIH, agVIHs,acVHB VHC,Core, Delta,