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FACS. Eine kurze Einführung in die Durchflußzytometrie C.Schütt. cs.ppt 2003. Bone marrow. Blood. Wie erhält man Informationen über die Funktionstüchtigkeit des Immunsystems ?. Bone marrow. cs22 origin of blood cells. pluripotent hematopoietic stem cell.

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Presentation Transcript

  1. FACS Eine kurze Einführung in die Durchflußzytometrie C.Schütt cs.ppt 2003

  2. Bone marrow Blood Wie erhält man Informationen über die Funktionstüchtigkeit des Immunsystems ? Bone marrow cs22 origin of blood cells pluripotent hematopoietic stem cell megakaryocyte/ erythrocyte progenitor granulocyte/macrophage progenitor common lymphoid progenitor common myeloid progenitor megakaryocyte erythroblast Granulocytes (or polymorphonuclear leukocytes) unknown precursor immature dentritic cell monocyte platelets erythrocyte T cell neutrophil eosinophil basophil B cell Effector cells Tissues Lymph nodes immature dendritic cell mature dendritic cell activated T cell mast cell macrophage plasma cell

  3. Die Expression von Rezeptoren oder Adhäsions- molekülen charakterisiert einen Zelltyp oder einen funktionellen Status aber im Mikroskop sehen sie alle gleich aus... doch mit markierten monoklonalen Antikörpern (mAb) mit Spezifitäten gegen solche Oberflächenmoleküle können wir diese Zellen im Fluoreszenzmikroskop oder im Durchflußzytometer differenzieren cs895f

  4. Death Die Expression von Rezeptoren oder Adhäsions- molekülen charakterisiert einen Zelltyp oder einen funktionellen Status gStainin CD3 CD69 activated T CD14 Mo T CD3 Es gibt z.Z. 247 verschiedene Oberflächenmoleküle, die mit monoklonalen Antikörpern als "Clusters of Differentiation" (CD) identifizierbar sind. cs895f

  5. CD Nomenklatur cs521 CD nomenclature Official Poster of the 7th Int. Workshop on Human Leukocyte Differentiation Antigens CD1 als Beispiel www.bdbiosciences.com/pharmingen/ CD247

  6. Antikörper als Handwerkszeuge gStainin Zwei Fluoreszenzfarbstoff-markierte mAbs, hier z.B. spezifisch für CD3 and CD14 "Oberflächenmarker" CD3 wird auf allen T Zellen exprimiert T unspezifische Bindung Spezifische Bindung des antiCD3mAb macht die Identifizierung aller T Zellen möglich cs895a cs895

  7. Ein typisches Durchflußzytometer Detector & Mechanical Computer System Fluidics Die mit Antikörpern "angefärbten" Zellen werden aus der Zellsuspension aufgesaugt und jede einzelne in einem Hüllstrom im Laserlicht analysiert... 10 000 Zellen in wenigen Minuten ! cs895e

  8. Grösse und Granularität Granulozyten FSC SSC (granularity) Laser Monozyten FSC (cell size) SSC Lymphozyten FSC- Vorwärtsstreuung; SSC- Seitwärtsstreuung cs895a

  9. cell number log fluorescence intensity(red) Identifizierung einer Zellpopulation z.B. Anteil der B Tellen: CD19+ 58% negativ für Antigen A FSC 42% positiv für Antigen A Laser FL2 cs895b

  10. cs895d FACS Charakterisierung einer Zellpopulation mittels Zweifarbenfluoreszenz A+(%) z.B.aktivierte T Zellen: CD3+CD69+ ruhende T Zellen: CD3+CD69 - A+ B+(%) FSC Log fluorescence (red) Laser Log fluorescence (green) FL1 FL2 neg. (%) B+(%)

  11. Mehr Informationen : www.medizin.uni-greifswald.de/immun/lehrver/cytometry/cytometry.htm cs 2003

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