Bases Nitrogenadas nos Ácidos Nucleicos

1. Bases Nitrogenadas nos Ácidos Nucleicos

2. Purinas Pirimidinas 5-Metildicetopirimidina Dicetopirimidina

5. Purificação de DNA porgradiente de Cloreto de Césio e visualizaçãoporluz U.V. O CsCl tem sua solução aquosa com uma gravidade específica próxima a do DNA . Quando esta solução é centrifugada por um longo período de tempo e em alta velocidade, atinge-se um equilíbrio com a formação de um gradiente de densidade contínuo, com a porção mais concentrada de CsCl no fundo do tubo e a porção menos concentrada no topo.

7. DOSAGEM DE ÁCIDOS NUCLEICOS POR ABSORÇÃO DE LUZ U.V. • D.O 260nm = 1,0 corresponde a • 50g/mLde DNA dupla fita • 40 g/mL de DNA ou RNA simples fita • 20 g/mL de oligonucleotídeos. • D.O 260nm/ D.O 280nm : fornece a pureza de uma preparação de ácidos nucleicos (1,8 e 2,0 para DNA e RNA respectivamente). Valores inferiores indicam contaminação com fenol e proteínas.

8. MARCAÇÃO NÃO RADIOATIVA DO DNA VIA BASES NITROGENADAS • DIGOXIGENINA: O DNA é ligado ao glicosídeo digoxigenina-11-UTP • BIOTINA: O DNA é ligado à biotina • COMPOSTOS FLUORESCENTES: O DNA é ligado a compostos fluorescentes como Texas Red.

9. dUTP-Digoxigenina dUTP- Biotina

10. Grupamentos Fosfatos nos ácidos nucleicos

11. dATP

12.  α β

13. MARCAÇÃO DO DNA MARCAÇÃO RADIOATIVA: Isótopos: Átomos que tem o mesmo número de prótons e diferentes números de nêutrons são chamados isótopos uns dos outros. Os isótopos são ditos radioativos quando contém uma combinação instável de prótons e nêutrons. A quebra e desintegração do isótopo radioativo, resulta na liberação de energia. As sondas genéticas podem ser marcadas com nucleotídeos marcados com radiosótopos no fosfato α, por exemplo α 32P .

15. AÇÚCARES DOS ÁCIDOS NUCLEICOS

16. Ligação P-O sensível a alkali e enzimas

17. Ligações Fosfodiéster Ligações fosfodiéster constituem o núcleo principal da vida já que são parte da constituição básica de todos os ácidos nucleicos. A hidrólise das ligações fosfodiester são catalisadas pelas fosfodiesterases (quebra do DNA)

18. Grupos fosfatos das ligações fosfodiester são carregados negativamente

19. Por quê o mesmo tamanho molecular pode migrar diferentemente no gel de eletroforese?

24. Etanol e isopropanol: A natureza higroscópica do DNA forma precipitados quando colocado em presença de etanol ou isopropanol e pequenas concentrações de cátions monovalentes.

25. Base-Pareamento nos ácidos nucleicos

31. Tratamento ácido: depurinação

34. A: desidratada B: Helicoidal alongada Laboratório de Biofísica do Kings College Química de formação : Rosalind Franklin (1920-1958):Novembro de 1951- Cadeia de fosfato-desoxiribose no exterior com bases no interior havendo entre 2 e 4 hélices co-axiais.

35. Maurice Wilkins 15/12/1916- 05/10/2004

36. 25 de abril de 1953 - Prêmio Nobel em 1962 junto com Maurice Wilkins) Uma estrutura de ferro e madeira, imitando uma hélice dupla, foi a forma que os biólogos James Watson e Francis Crick encontraram para demonstrar como é a forma da molécula de DNA.

37. DNA B • Hélice gira para a direita e a rotação entre 2 pares de bases é de 34,6° • Volta completa da hélice a cada 10,4 pb • Diâmetro da hélice é de 2,37nm • Uma volta percorre 3,4nm e cada base adiciona 0,34nm

40. Estrutura e propriedades dos RNAs • 80% do material genético das células: rRNA • 15%: tRNA • 5%: mRNA • 2%: sn RNA e scRNA • Regiões dupla fita (Pontes de H) são rompidas por altas temperaturas e calor (como no DNA!) • Ligações fosfodiester são rompidas por alkalis (NÃO OCORRE NO DNA!!!!)

41. BASE PAREAMENTO RNA-DNA (FORMAÇÃO DE HETERODUPLEXES ou Hélices híbridas) HETERODUPLEXES dA : rU (+estável) rA : dT (+ estável) dG : rC (++ estável) dC : rG (+++ estável) HOMODUPLEXES DNA dC : dG (+ estável) dA : dT HOMODUPLEXES RNA rA : rU rG : rC rG : rU (---- estável)

42. P= procariotos, E= eucariotos

43. Transcrição do mRNA

44. Cap:Consiste de uma guanina modificada que é ligada ao terminal 5’ do pré-mRNA e é adicionada pela RNA polymerase II. Protege o mRNA de degradação por enzimas que degradam a partir do terminal 5’ e serve como ponto de encontro (“asssemby”) das proteínas necessárias para recrutar a subunidade ribossomal menor para iniciar a tradução. Cauda Poli A: É uma agregação de adeninas adicionadas pela RNAP II ao terminal 3’do mRNA. Completa a molécula deixando-a pronta para ser transportada para o citoplasma.

45. mRNA RNA polimerase II: Transcreve os genes do mRNA (e também o snRNA).

48. Ribosomos são compostos por moléculas de RNA e proteínas formando grandes complexos que compreendem a maior parte da massa de uma célula. O ribossomo tem um coeficiente de sedimentação de 70S, e pode ser dividido em duas subunidades: 50S e 30S. Estas subunidades são compostas por unidades separadas: a subunidade 50S possui 2 moléculas de RNA, uma de 23S e outra de 5S bem como 34 proteínas diferentes. A subunidade 30S tem como subunidades a molécula de rRNA de 16S e 21 proteínas diferentes.

49. rRNA RNA polymerase I (Pol I): Transcreve os genes do rRNA dos precursores 23S e 16S RNA polymerase III (Pol III): Transcreve os genes para o rRNA 5S

50. tRNA RNA polymerase III (Pol III): Transcreve os genes para os tRNAs.