100 likes | 371 Views
RT(reversā jeb apgrieztās transkripcijas) -PCR. Madara Zamberga LUBF 2.mag. kurss Stud.apl.Nr . mz09014. Kas ir RT-PCR?. Pamatprincips, kā PCR. RT-PCR - RT ( reverse transcription ) solī tiek veikta vienpavediena komplimentārās DNS ( cDNS ) sintēze, izmantojot mRNS. Vēsture.
E N D
RT(reversā jeb apgrieztās transkripcijas) -PCR Madara Zamberga LUBF 2.mag. kurss Stud.apl.Nr. mz09014
Kas ir RT-PCR? Pamatprincips, kā PCR. RT-PCR- RT (reversetranscription) solī tiek veikta vienpavedienakomplimentārās DNS (cDNS) sintēze, izmantojot mRNS.
Vēsture 1983.gadā atklāja PCR. 1993. saņemta Nobela prēmija. PCR tehnika ļauj amplificētmRNS, pēc pirmās mRNS sintēzes par cDNS, nodēvējot to par RT-PCR. (KaryMullis)
Izmantošana • Ģenētisku slimību diagnostikā (Leši-Nīhana sindroms u.c.). • Pētot RNS vīrusu genomus (retrovīrusiem, A tipa gripas vīrusiem u.c.). • Tiek meklēts veids, kā izmantot RT-PCR audzēja diagnostikā.
Nepieciešamie materiāli • mRNS • Oligo(dt) praimeris • dNTP (dezoksiribonukleotīdu) maisījums • PCR buferis • Nucleasefree ūdens • RevertAid enzīms (reversā transkriptāze) • RiboLockenzīms (traskriptāzesinaktivētājs) • SYBR Green (palielina fluorescences intensitāti) • PCR aparāts
Metodes +/- (+) RT-PCR ir augsta jūtība uz mRNS. (+) RT-PCR tiek izmantoti specifiski praimeri, lai iegūtu cDNS sintēzi. (+)RT-PCR var ātri iegūt rezultātus. (-) RT-PCR detektē transkriptus, nevis funkcionālus proteīnus. (-) RT-PCR līdzīga tradicionālajam PCR.
Izmantotie literatūras avoti • http://www.gene-quantification.de/poster-rt-pcr.jpg • http://biotech.about.com/od/proteintechnology/g/Reverse-Transcriptase-Pcr.htm • Carlossetal., 2004. Reversetranscriptionandpolymerasechainreaction: principlesandapplicationsindensity. ApplOral Sci;12(1):1-11. • Helmut etal. 2003.mRNA ExtractionandReverseTranscription-PCRProtocolforDetectionofnifHGeneExpressionbyAzotobactervinelandiiinSoil. AppliedandEnvironmetalMicrobiology, 69(4):1928-1935. • Moreletal. 1998.In situ reversetranscription-polymerasechainreaction. BiologyoftheCell 137-154.
Jautājums! • Kāds ir RT-PCR metodes galvenais pamatprincips?