DFGSM3 - CM1 – 2012/2013

1. UE Biopathologie Tissulaire DFGSM3 - CM1 – 2012/2013 Rôle des techniques spéciales dans: la démarche diagnostique l’évaluation du pronostic des maladies les choix thérapeutiques (notion de biomarqueur) Pr Laurence LAMANT Service d’Anatomie et Cytologie Pathologiques CHU PURPAN Lamant.l@chu-toulouse.fr

2. Techniques spéciales Colorations histochimiques Histoenzymologie Microscopie électronique Immunohistochimie Biologie moléculaire in situ et non in situ

3. Techniques spéciales Colorations histochimiques Histoenzymologie Microscopie électronique Immunohistochimie Biologie moléculaire in situ et non in situ

4. Perls PAS Ziehl Fontana But ? 1/Mettre en évidence des constituants particuliers dans les cellules ou dans la matrice extracellulaire 2/Mettre en évidence des agents infectieux Trich Masson Rouge Congo PAS

5. Les colorations les plus courantes

6. Intêrét des colorations spéciales dans la démarche diagnostique ?

7. Réaction de Ziehl: mycobactérie Patient immunodéprimé, lésions des doigts et avant bras droit

8. Réaction de Ziehl: mycobactérie Patient immunodéprimé, lésions des doigts et avant bras droit

9. Coloration du PAS: Candida Albicans

10. Cas clinique PAS Mme TIB…, 38 ans, atteinte d’une leucémie et ayant subi une greffe de moelle osseuse, présente une défaillance multiviscérale. Biopsie hépatique. Aspergillose

11. Les colorations les plus courantes Substances pathologiques: -par leur présence (agent pathogène)

12. Mr DA…Etienne né le 7/1/1955 Ascite Hypothèses ? • Insuffisance cardiaque (ou obstacle sus-hépatq) • Insuffisance rénale, syndrome néphrotique • Cancer (mésothéliome, carcinose, CHC, méta hépatique, cancer gynécologique si Femme…) • Cirrhose (1ère étiologie en France) Renseignements cliniques Patient consultant pour ascite et œdème des membres inférieurs. Examen biologique: augmentation discrète des transaminases

13. Mr DA…Etienne né le 7/1/1955 Biopsie hépatique Renseignements cliniques Patient consultant pour ascite et œdème des membres inférieurs. Examen biologique: augmentation des transaminases

14. Mr DA…Etienne né le 7/1/1955 Trichrome de Masson Diagnostic ? CIRRHOSE Trichrome de MassonFoie Normal

15. Les colorations les plus courantes Substances pathologiques: - par leur présence - par leur abondance (Subst. normales en quantité anormale)

16. Les colorations les plus courantes • Substances normales en situation attendue

17. Coloration du Bleu Alcian sur cellules caliciformes mucisécrétantes de la muqueuse intestinale Coloration de Fontana sur naevus naevocellulaire cutané Peu utile !

18. Tumeur maligne différenciée d’origine glandulaire = Adénocarcinome bien différencié Tissu sain

19. Coloration peu utile ! Adénocarcinome bien différencié Tissu sain

20. Adénocarcinome bien différencié Tissu sain Tumeur maligne peu différenciée

21. Adénocarcinome peu différencié Coloration très utile ! Adénocarcinome bien différencié Tissu sain Tumeur maligne peu différenciée

22. S’agit-il d’une tumeur : Différenciée Les deux Indifférenciée Je ne sais pas POINTS

23. Carcinome malpighien Adénocarcinome Mélanome Tumeurs malignes différenciées: ressemblent au tissu normal dont elles dérivent Lymphome

24. Adénocarcinome peu différencié Tumeurs malignes indifférenciées: pas de ressemblance avec un tissu normal ????? Nécessité de colorations spéciales

25. Fontana Tumeur pulmonaire maligne peu différenciée Métastase pulmonaire d’un Mélanome

26. Les colorations les plus courantes Substances pathologiques: - par leur présence - par leur abondance - par leur situation (Subst. « normales » en situation anormale)

27. Mélanine Pas de Mélanine Mr RO…Damien né le 5/6/1938 • Renseignements cliniques Patient ayant un antécédent de mélanome

28. Mr RO…Damien né le 5/6/1938 Coloration du Bleu Alcian, inutile dans ce contexte Adénocarcinome colique bien différencié Renseignements cliniques Patient ayant un antécédent de mélanome. Consulte pour des troubles du transit amenant à une coloscopie qui met en évidence une lésion polypoïde suspecte. Biopsie sous endoscopie:

29. Mr RO…Damien né le 5/6/1938 Bilan d’extension (TDM) Pourquoi ? Métastase du mélanome ou du carcinome colique ? Autre lésion (bénigne, maligne…)? Biopsie hépatique d’une de ces lésions Traitement totalement différent Renseignements cliniques Patient ayant un antécédent de mélanome. Consulte pour des troubles du transit amenant à une coloscopie qui met en évidence qui met en évidence une lésion polypoïde suspecte. Biopsie : adénocarcinome colique bien différencié

30. Foie normal péritumoral Nodule Examen microscopique La carotte biopsique adressée qui mesure 20 mm montre un parenchyme hépatique dont l’architecture normale est détruite par une prolifération tumorale. Elle est constituée d’amas cellulaires sans architecture particulière. Les cellules sont atypiques, fréquemment en mitose.

31. Tumeur maligne peu différenciée/indifférenciée Métastase du mélanome ou du carcinome colique ? Autre tumeur ? Foie normal péritumoral Pas de glande Pas de mélanine Pas de kératine HE HE Comment aller plus loin ?

32. Foie Discrets dépôts de Mélanine invisibles sur HE? COLON PEAU Présence d’une mucisécrétion?

33. Bleu Alcian Examen microscopique La carotte biopsique adressée qui mesure 20 mm montre un parenchyme hépatique dont l’architecture normale est détruite par une prolifération tumorale. Elles est constituée d’amas cellulaires sans architecture particulière. Les cellules sont atypiques, fréquemment en mitoses. La coloration du Bleu Alcian met en évidence des vacuoles de sécrétion au sein de certaines cellules. La coloration de Fontana est négative. Métastase du mélanome ou du carcinome colique?

34. Métastase hépatique de l’adénocarcinome colique Chimiothérapie adaptée à un adénocarcinome colique métastatique

35. Pas de glande Pas de mélanine Pas de kératine Mme F.. Née en 1970 • Renseignements cliniques Patiente sans antécédent particulier qui a consulté pour épilepsie et chez qui est découverte une tumeur cérébrale unique. Exérèse. Tumeur primitive? Métastase?

36. Bleu Alcian Examen microscopique Il s’agit d’un parenchyme cérébral siège d’une prolifération tumorale maligne d’architecture diffuse, ne formant pas de structure glandulaire, sans pigment identifiable sur la coloration de routine. Pas de signe de kératinisation. Les cellules sont très atypiques, fréquemment en mitoses. Les caractéristiques de cette tumeur n’évoquent pas une tumeur primitive. Cependant, la coloration du Bleu Alcian ne met pas en évidence de vacuoles de sécrétion; La coloration de Fontana ne met pas en évidence de mélanine.

37. Autre tumeur: Lymphome cérébral? Métastase de carcinome, mélanome, sarcome ? Diagnostic ??? Tumeur primitive : non (sur la base de son aspect cytologique,de sa bonne limitation)

38. Comment aller plus loin ?? Conservation d’antigènes des lignées lymphoïdes, épithéliales, conjonctives ou mélanocytaires ?? Outil? Immunohistochimie

39. Techniques spéciales Colorations histochimiques - Histoenzymologie Microscopie électronique Immunohistochimie Biologie moléculaire in situ et non in situ

40. Immunohistochimie • Principe ? Exemple de l’IHC immunoenzymatique indirecte 1 = Antigène 2 = Anticorps primaire 3 = Anticorpssecondaire couplé au complexe avidine-biotine péroxydase 4 = Révélation par substrat de la peroxydase (DAB)

41. Immunohistochimie • Principe ? Exemple de l’IHC immunoenzymatique indirecte 1 = Antigène 2 = Anticorps primaire 3 = Anticorpssecondaire couplé au complexe avidine-biotine péroxydase 4 = Révélation par substrat de la peroxydase (DAB)

42. Immunohistochimie • Principe général Exemple de l’IHC immunoenzymatique indirecte Exemple de l’IHC immunoenzymatique indirecte Exemple de l’IHC immunoenzymatique directe

43. Immunohistochimie • Objectif ? Mettre en évidence des Ag intracellulaires ou extracellulaires grâce à des Ac spécifiques

44. Immunohistochimie Sur quel matériel ? • Coupes en congélation • Coupes en paraffine (démasquage Ag) • Examen cytologique

45. Immunohistochimie Sur quel matériel ? • Coupes en congélation • Coupes en paraffine (démasquage Ag) • Examen cytologique

46. Immunohistochimie Sur quel matériel ? HbS Ki67 erbB2 Antigène cytoplasmique Antigène nucléaire Antigène membranaire • Coupes en congélation • Coupes en paraffine (démasquage Ag) • Examen cytologique • Quels antigènes ?

47. Immunohistochimie Avec quel mode de révélation ? • Immunoenzymatique (indirecte; peroxydase, PAL) Coupes fixées erbB2 Coupes congelées Adénocarcinome sein • Immunofluorescence (directe) Coupes fixées Anti-IgG Coupes congelées Pemphigoïde bulleuse

48. Immunohistochimie Intérêt diagnostique Intérêtpronostique Intérêt thérapeutique

49. S’agit-il d’une tumeur : Différenciée Les deux Indifférenciée Je ne sais pas Intérêtdiagnostique Diagnostic des tumeurs indifférenciées POINTS

50. Bleu Alcian + Tumeurs malignes indifférenciées: pas de ressemblance avec un tissu normal Nécessité de colorations spéciales Adénocarcinome peu différencié