Содержание.

1. Технологические основы приготовления диагностических препаратов: диагностических сывороток, антигенов, бактериофагов и аллергенов

2. Содержание. Введение: 1. Что такое диагностические препараты. 2. Технология приготовления бактериальных антигенов. 3. Технология приготовления вирусных антигенов. 4. Технология приготовления аллергенов. 5. Технология приготовления бактериофагов. Заключение.

3. Список литературы • 1. Тихонов И.В. «Биотехнология» Санкт – Петербург Гиорд 2005год. • 2. Аксенов М.Ю. «Диагностика инфекционных заболеваний методом ПЦР» М – 1993год. • 3. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. «Основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов». М.: ВНИИТиБП, том 1; 2000 г. • 4. Грязнева Т.Н., Тихонов И.В. «Основы производства гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов». Учебно-методическое пособие для ВУЗов. М.: МГАВМиБ, 2003 г, 49 с. • 5. Кирюткин Г.В., Горлов И.Ф. «Справочник ветеринарных биологических препаратов». Волгоград: типография Химпром, 2002 г. • 6. «Ветеринарная энциклопедия. Гл. ред. К.И. Скрябин. М.: Изд-во «Советская энциклопедия», 1975 г.

4. Диагностические препараты • 1.Иммунные сыворотки • 2.Антигены-диагностикумы • 3.Бактериофаги • 4.Аллергены • 5.Моноклональные антитела

5. Технологическая схема приготовления гипериммунных сывороток • 1.Приготовление антигенов • 2.Заготовка животных и их карантинирование • 3.Вакцинация животных-продуцентов

6. Подготовка животных-продуцентов • Грундиммунизация животных • Отбор продуцентов • Гипериммунизация животных-продуцентов • Получение гипериммунной сыворотки

7. Изготовление диагностической сыворотки • 1.Взятие крови у продуцентов • 2.Получение нативной сыворотки • 3.Очистка и концентрирование • 4.Фильтрация через пластины ФиСФ5.Консервирование6.Контроль

8. Диагностические сыворотки 1.Агглютинирующие 2.Преципитирующие 3.Лизирующие (комплементсвязывающие) 4.Антитоксические 5.Меченные (люминесцирующие, иммуноферментные,радиоиммунные)

9. Диагностические антигены • 1.Корпускулярные (взвесь живых или убитых микробов) • 2.Тканевые антигены вирусов или риккетсий • 3.Растворимые антигены (экстракты микробов, продукты метаболизма в т.ч. токсины

10. Приготовление эритроцитарного диагностикума

11. Диагностические методы • 1.Реакция агглютинации (РА,РБП,ГНГА) • 2.Реакция связывания комплемента (РСК) • 3.Реакция преципитации (РП,РДП) • 4.Реакция иммунофлюоресценции (МФА,РИФ) • 5.Иммуноферментный анализ (ИФА) • 6.Радиоиммунный анализ (РИД) • 7.Реакция нейтрализации (РН) • 8.Реакция гемадсорбции (РГА)

12. Диагностические аллергены • 1.Туберкулин (ППД,АТК) • 2.Бруцеллин • 3.Малеин

13. Технология приготовления туберкулинов 1.Выращивание в среде Коттона с аспарагином и лимонной кислотой 2.Бактериальную массу автоклавируют 3.Белок культуральной жидкости осаждают трихлоруксусной кислотой 4.Центрифугируют и повторно осаждают белок сернокислым аммонием 5.Надосадок удаляют, приципитат растворяют дист.Н2О и диализируют для удаления сернокислого аммония 6.Раствор туберкулина подщелачивают и фильтруют 7.Расфасовывают во флаконы объемом 10-20 мл и лиофильновысушивают. 8.Проводят контроль туберкулинов на растворимость, стерильность, рН, безвредность, специфичность и содержание туберкулиновых единиц

14. Технология приготовления бруцеллина - Прогревают в реакторе при t -105 -1100Спри перемешивании, охлаждают и центрифугируют - Надосадок фильтруют через стерилизующие пластины, разводят физраствором 1:50, стерилизуют при 105 – 1100С - Доводят рН до 7,2 – 7,4 , разливают по флаконам, стерилизуют в автоклаве при t – 105 - 1100С и выдерживают трое суток при 370С - Контроль на стерильность, содержание бактерийного белка, рН, безвредность, спецефичность и активность. • Штамм Вr. abortus B -1 выращивают в питат. среде с 0,5% глюкозы глубинным методом, 4 – 5 суток

15. Технология приготовления маллеина 1.Actinobacillus mallei № 5584 выращивают в мясо-пептонном глицериновом бульоне (МПГБ) в бутылях в течение 4 месяцев при 37°С. 2.Культуральную суспензию автоклавируют и отстаивают в течение 4-х месяцев при 20°С. 3.Надосадочную жидкость фильтруют через стерилизующие пластины. 4.Готовый препарат контролируют на стерильность, безвредность и специфичность.

16. Фагодиагностика • Бактериофаги-вирусы способные инфицировать бактериальную клетку, репродуцироваться в ней и вызывать её лизис или переход в лизогенное состояние

17. Биологические формы бактериофагов • 1.Вегетативный-репродуцируется внутри бакклетки и не обнаруживается • 2.Вирулентный-вызывает лизис клетки и выход в среду своего потомства • 3.Дефектный-не способен к репродукции полноценного фага • 4.Умеренный-существует внутри клетки в форме профага, вызывая лизогению клеток

18. Специфичность бактериофагов • 1.Полифаги-лизируют родственные бактерии разных видов • 2.Монофаги-лизируют бактерии одного вида • 3.Фаговары-лизируют только определенные варианты (фаготипы) данного вида бактерий

19. Специфичность бактериофагов • 1.Полифаги-лизируют родственные бактерии разных видов • 2.Монофаги-лизируют бактерии одного вида • 3.Фаговары-лизируют только определенные варианты (фаготипы) данного вида бактерий

20. А Г Развитие вирулентного фага в восприимчивой бактериальной клетке Б Д В А — прикрепление фага; Б — проникновение ДНК фага внутрь клетки; В — синтез белковых оболочек новых вирусных частиц; Г — обнаружение вирулентных вирусных частиц; Д— освобождение новых фаговых частиц.

21. Адсорбция фага на бактериальной клетке

22. Строение бактериофага

23. Бляшки, образованные бактериофагом λ

24. Рис.13. Крупные негативные колонии(В.Я. Ганюшкин,1984)Рис.12 Негативные колонии среднего размера(В.Я. Ганюшкин,1984)