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Ativação Neuronal e c-Fos. Ciclo de seminários do LCM 2011 Priscila Cassolla. Introdução. Ativação Neuronal e c-Fos. Ativação neuronal Neurônios/Sinapses Comunicação celular. Identificação das áreas cerebrais ativadas após um estímulo
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Ativação Neuronal e c-Fos Ciclo de seminários do LCM 2011 Priscila Cassolla
Introdução Ativação Neuronal e c-Fos Ativação neuronal Neurônios/Sinapses Comunicação celular Identificação das áreas cerebrais ativadas após um estímulo Localização da atividade neuronal Análise do RNAm c-fos ou da proteína c-Fos
Atividade Neuronal – Comunicação celular Comunicação celular • Neurônios Hansen, J. T. & Koeppen, B. M. – Netter’s Atlas ofhumanphysiology
Atividade Neuronal – Comunicação celular Comunicação celular • Sinapses http://www.mind.ilstu.edu/curriculum/neurons_intro/neurons_intro.php
Atividade Neuronal – Comunicação celular Sinapses e expressão gênica
Atividade Neuronal – Comunicação celular Sinapses e expressão gênica West, A. E. et al, 2002
Proteína c-Fos c-Fos??? • O que é c-Fos? • Qual o papel fisiológico da c-Fos no neurôrio? • Por que c-Fos é um marcador de atividade neuronal? • Como c-Fos é detectada?
Proteína c-Fos O que é c-Fos? • 1ª proteína caracterizada da família Fos: c-Fos, FRA-1, FRA-2 e FosB( porção N-terminal) • 380 aas 90% homologia com o oncogenev-Fos Retrovírus do Sarcoma murino osteogênico Finkel-Biskis-Jinkins Immediate-early gene (IEG) c-fos, c-jun e c-myc Fatores de transcrição
Proteína c-Fos Qual o papel da c-Fos no neurônio? • Após dimerização com membros da família Jun (c-Jun, JunB e JunD), o dímero Fos/Junliga-se à região AP-1 para promover ou inibir a transcrição de diversos genes (proliferação, diferenciação e apoptose) Zíper leu Aprendizado e memória? (FRAs e FosB)
Proteína c-Fos Clayton, D. F., 2000
Proteína c-Fos Chinenov, Y e Kerppola, T.K., 2001
Proteína c-Fos Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal? • Não é expressa (ou pouco expressa) em condições basais – sem geração de potencial de ação; • É rapidamente expressa em resposta aos sinais de superfície celular (estímulos externos); • Expressão transitória com meia-vida mais curta do que os outros membros da família Fos; • O estresse da eutanásia não interfere;
Proteína c-Fos Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal? • A proteína c-Fos é nuclear, portanto permite estudos com dupla-marcação para identificação do fenótipo neuronal
Proteína c-Fos Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal? Kovács, K. J., 2008
Proteína c-Fos Como c-Fos é detectada? • RNAm da c-Fos Hibridização in situ • Proteína c-FosImunohistoquímica Clayton, D. F., 2000
Proteína c-Fos Como c-Fos é detectada? • RNAm da c-Fos Hibridização in situ http://www.colorado.edu/intphys/Class/IPHY3730/image/figure6-9.jpg
Proteína c-Fos Como c-Fos é detectada? • Proteína c-FosImunohistoquímica http://www.komabiotech.co.kr/www/techniques/immunodection/immTechniques.html; Thaler, J. P. et al., 2009