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Fernanda Rocha Gustavo Garcia Tiago Medina

HIV X Imunoterapia. Fernanda Rocha Gustavo Garcia Tiago Medina. HIV- V írus da I munodeficiência H umana. HIV- ( human imunodeficiency virus): Familia: Retroviridae Gênero: Lentivirus HIV-1 – (Subtipos de A-J) HIV-2 Sintomas: Semelhante gripe comum.

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Presentation Transcript

  1. HIVXImunoterapia Fernanda Rocha Gustavo Garcia Tiago Medina

  2. HIV- Vírus da Imunodeficiência Humana • HIV- (human imunodeficiency virus): • Familia: Retroviridae • Gênero: Lentivirus • HIV-1 – (Subtipos de A-J) • HIV-2 • Sintomas: • Semelhante gripe comum Partículas do HIV-1 na superfície de macrófagos infectados

  3. População infectada com HIV Eastern Europe & Central Asia 1.4 million [1.3 million – 1.6 million] Western & Central Europe 820 000 [720 000 – 910 000] North America 1.5 million [1.2 million – 2.0 million] East Asia 770 000 [560 000 – 1.0 million] Middle East&North Africa 460 000 [400 000 – 530 000] Caribbean 240 000 [220 000 – 270 000] South & South-East Asia 4.1 million [3.7 million – 4.6 million] Sub-Saharan Africa 22.5 million [20.9 million – 24.2 million] Central & South America 1.4 million [1.2 million – 1.6 million] Oceania 57 000 [50 000 – 64 000] Total: 33.3 million[31.4 million – 35.3 million]

  4. Estimativa de novos casos de infecção pelo HIV Eastern Europe & Central Asia 130 000 [110 000 – 160 000] Western & Central Europe 31 000 [23 000 – 40 000] North America 70 000 [44 000 – 130 000] East Asia 82 000 [48 000 – 140 000] Middle East&North Africa 75 000 [61 000 – 92 000] Caribbean 17 000 [13 000 – 21 000] South & South-East Asia 270 000 [240 000 – 320 000] Sub-Saharan Africa 1.8 million [1.6 million – 2.0 million] Central & South America 92 000 [70 000 – 120 000] Oceania 4500 [3400 – 6000] Total: 2.6 million [2.3 million – 2.8 million]

  5. Cinética da infecção pelo HIV Abaixo de 200 células/ml: Muito vulnerável, tratar imediatamente; Entre 200 e 350 células/ml: Vulnerável, deve ser iniciado o tratamento Entre 350 e 500 células/ml: Pouco vulnerável, pode começar a critério médico; Acima de 500: Saudável, não precisa começar o tratamento.

  6. Formas de terapias para o controle da infecção viral Nature Biotechnology 25, 1395 - 1402 (2007)/ Ann Intern Med. 1996 Apr 1;124(7):654-63.

  7. Sistema Imune versus Infecção Viral Nature Reviews Immunology 10, 11-23 (January 2010)

  8. Propagação do HIV

  9. Pontos de intervenção por drogas antivirais Nature Biotechnology 25, 1395 - 1402 (2007)

  10. Resposta imune durante infecção viral

  11. -100µg/kg de IL7 por 9 dias

  12. -ATR+ 100µg/kg de IL7 por 26 dias

  13. 8dpi – 10µg de IL7 ou PBS por 2 semanas

  14. -3 ou 10 μg/kg de IL-7; 3x/semana por 16 dias

  15. IL-7 administration drives T cell-cycleentryandexpansion in HIV-infection Objetivo: Verificar a atividade biológica da IL-7 recombinante humana administrada em pacientes infectados com HIV.

  16. A rhIL-7 é tóxica para pacientes infectados com HIV? rhIL-7/ placebo Teste para anticorpos anti-IL-7 toxicidade 1 4 56 14 28 A concentração de 30 mg/kg de rhIL-7 é a máxima tolerada pelos pacientes.

  17. Qual o perfil farmacocinético da rhIL-7 após seu único inóculo subcutâneo? rhIL-7 Dose única 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 4, 8, 12, 24, 48 e 72h plasma ELISA Os níveis de IL-7 no plasma aumentaram de modo dependente da dose. O perfil farmacocinético torna-se não linear com o aumento da dose.

  18. Como os linfócitos circulantes se comportam após administração de rhIL-7? rhIL-7 Dose única 0, 1, 2, 4, 14, 28 dias Placebo IL-7 (3mg/Kg) IL-7 (10mg/Kg) IL-7 (30mg/Kg) IL-7 (60mg/Kg) PBMC Citometria de Fluxo Uma única dose de IL-7 induziu um aumento no número de linfócitos T CD4+ e CD8+ circulantes.

  19. A administração da IL-7 induziu o aumento linfocitário de alguma sub-população específica? rhIL-7 Dose única 0, 1, 2, 4, 14, 28 dias PBMC Citometria de Fluxo O aumento de linfócitos foi predominante entre os linfócitos T de memória central.

  20. A administração de rhIL-7 induz proliferação de linfócitos? rhIL-7 Dose única Ki67  proteína nuclear expressa em todas as fases do ciclo celular, exceto na fase de repouso 0, 1, 4, 14, 28 dias Placebo IL-7 (3mg/Kg) IL-7 (10mg/Kg) IL-7 (30mg/Kg) IL-7 (60mg/Kg) Linfócitos Proliferação celular

  21. rhIL-7 induz proliferação e ativação de linfócitos? Treg A administração de rhIL-7 induziu os linfócitos T a entrarem em ciclo celular, exceto a subpopulação de células T reguladoras.

  22. A administração de rhIL-7 induz ativação de linfócitos? rhIL-7 Dose única Placebo IL-7 0, 1, 4, 14, 28 dias Linfócitos Ativação celular A administração de rhIL-7 induziu ativação dos linfócitos T no mesmo período que eles iniciaram ciclo celular.

  23. Qual o efeito da rhIL-7 sobre as células T CD8+ específicas ao antígeno viral? rhIL-7 Dose única Tetrâmero + Peptídeos Citomegalovirus; Epstein-Barrvirus; Influenza virus; HIV 0, 4, 28 dias PBMC Citometria de Fluxo Uma única dose de rhIL-7 aumentou o recrutamento não seletivo de células T CD8+ de memória específicas ao antígeno em ciclo celular.

  24. Qual o efeito da rhIL-7 sobre os linfócitos B? IL-7 CD21low CD21high Imatura Transição rhIL-7 Dose única 0, 4, 28 dias CD10 B PBMC O número de células B circulantes não foi alterado Citometria de Fluxo A administração de rhIL-7 induziu a emergência de células B de imaturas para uma fase de transição.

  25. IL-7 IL-7 IL-7 IL-7 IL-7 IL-7 IL-7 IL-7 IL-7 IL-7 Memória central 3-30mg/kg Treg CD4 B CD8 CD10 CD8 CD8 CD8 CD8 CD8 D8 CD8 CD4 CD4 CD4 CD4 CD4 CD8 CD4 Treg CD4 Imatura Transição B B A IL-7 possui um perfil favorável para o desenvolvimento terapêutico para pacientes com HIV ou outras linfopenias.

  26. Objetivo: Investigar o potencial terapêutico da IL-7 na infecção crônica pelo LCMV, na tentativa de reverter a exaustão celular.

  27. O tratamento com IL-7 aumenta o número de células no baço durante a infecção com LCMV? Infecção com o clone 13 - LCMV C57BL/6 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas Quantificação do número de células no baço em diferentes dias Houve aumento de linfócitos T CD4, T CD8 e linfócitos B após tratamento com IL-7

  28. O tratamento com IL-7 aumenta o número de células T CD8 específicas para o LCMV? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas Remoção do baço (Marcação com tetrâmero) Citometria – células TCD8 específicas para TetGP33+, TetGP276+ e TetNP396+ A IL-7 promoveu o aumento de células T CD8 específicas para o LCMV

  29. O aumento no número de células também é observado em outros órgãos? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Fígado Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas 29° dia Citometria para TCD4 e TCD8 totais e específicas para os tetrâmeros Histologia do fígado Após o tratamento com IL-7, houve aumento no infiltrado de células totais e específicas para o vírus no fígado, cérebro, pulmões e rins

  30. O aumento no número de células obtidas após o tratamento com IL-7 se traduz em ganho funcional? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas 29° dia Citometria – células TCD4 e TCD8 específicas para o vírus As células T CD4 e TCD8 expandidas pela IL-7 são funcionais.

  31. ... Células T de camundongos infectados com o clone 13 de LCMV possuem altos níveis de PD-1 (Barber et al., 2006). Os níveis de PD-1 nas células T estão diminuídos após o tratamento com IL-7? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas 29° dia FACS - Expressão de PD-1 nas células TCD4 e TCD8 O tratamento com IL-7 diminuiu a expressão de PD-1 nas células T CD4 e T CD8

  32. Camundongos tratados com IL-7 eliminam eficientemente o vírus? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas Titulação viral em vários dias – Contagem de placa viral A IL-7 facilitou a eliminação viral dos reservatórios crônicos (baço, fígado, rins e cérebro)

  33. Quais citocinas estão elevadas durante o tratamento com IL-7? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas Dosagem de citocinas séricas - ELISA Citocinas do padrão Th1 e Th17 estão aumentadas durante o tratamento com IL-7. IL-10 aumenta após a eliminação do vírus

  34. O tratamento com IL-7 induz dano tecidual decorrente da resposta imune inflamatória? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas Dosagem de AST e ALT no soro O tratamento com IL-7 não aumenta os níveis séricos das enzimas indicativas de dano hepático

  35. A produção de IL-22 está aumentada durante o tratamento com IL-7? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas 29° dia Dosagem de IL-22 no soro - ELISA O tratamento com IL-7 também aumenta a produção sérica de IL-22

  36. O dano hepático limitado foi consequência do efeito citoprotetor da IL-22? A IL-22 produzida durante o tratamento com IL-7 impede os danos celulares no fígado

  37. O tratamento com IL-7 altera o número de células T reguladoras? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 3 semanas FACS – Tregs no baço e no fígado O número absoluto de Tregs aumenta após o tratamento com IL-7, mas a frequência está diminuída em relação ao número total de células T

  38. A depleção de Tregs durante o tratamento com IL-7 altera o número de células T totais e específicas para o LCMV? A depleção de Tregs aumentou o número de células T CD4 e T CD8 totais e específicas para o vírus.

  39. O aumento de células T em animais depletados de Tregs está relacionado com aumento de IL-2? Dosagem de citocinas no soro A maior produção de IL-2 induzida pelo tratamento com IL-7 promove o aumento no número de células T.

  40. A depleção de Tregs durante o tratamento com IL-7 provocou danos hepáticos? Dosagem de AST no soro A depleção de células T reguladoras não provocou danos hepáticos

  41. Socs3 é expresso durante a infecção crônica por LCMV? Infecção crônica com o clone 13 - LCMV Infecção aguda - cepa Armstrong de LCMV OU Sorting das células T Western Blotting – Expressão de Socs3 Socs3 é altamente expresso na infecção crônica causada por LCMV

  42. O tratamento com IL-7 inibe a expressão de Socs3 durante a infecção crônica por LCMV? Infecção com o clone 13 - LCMV 8° dia Tratamento com IL-7 ou PBS por 5 dias Sorting das células T Western Blotting – Expressão de Socs3 A expressão de Socs3 nas células T foi inibida após tratamento com IL-7

  43. Socs3 é o principal inibidor da resposta imune contra a infecção crônica por LCMV? Infecção com o clone 13 - LCMV Infecção com o clone 13 - LCMV Socs3wt/wtLck-Cre- Socs3fl/flLck-Cre+ Remoção do baço FACS – Células TCD8 específicas para NP396, GP276 e GP33 Socs3 inibe a resposta imune específica contra o LCMV

  44. As células T permanecem funcionais após a deleção condicional de Socs3? Infecção com o clone 13 - LCMV Infecção com o clone 13 - LCMV Socs3wt/wtLck-Cre- Socs3fl/flLck-Cre+ Remoção do baço FACS – Células TCD4 e TCD8 produtoras de citocinas As células T CD4 e TCD8 continuam funcionais na ausência de Socs3

  45. O vírus é eliminado de órgãos reservatórios na ausência de Socs3? A deficiência de Socs3 propiciou a eliminação viral de vários órgãos reservatórios

  46. Conclusão

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