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DOSAGEM C-Hb e M-Hb

DOSAGEM C-Hb e M-Hb. CO-OXIMETRO Princípio do método : Amostras de sangue total são quimicamente hemolisadas por íntimo contato com agente surfactante não iônico. O sangue hemolisado é então analisado espectrofotometricamente , através de um fluxo em cubeta termostática.

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DOSAGEM C-Hb e M-Hb

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Presentation Transcript

  1. DOSAGEM C-Hb e M-Hb

  2. CO-OXIMETRO • Princípio do método: Amostras de sangue total são quimicamente hemolisadas por íntimo contato com agente surfactante não iônico. O sangue hemolisado é então analisado espectrofotometricamente , através de um fluxo em cubeta termostática. • O sangue total é aspirado pelo instrumento, misturado com diluente, hemolisado, e mantido em temperatura constante na cubeta. • A absorbância é gerada através de medida de luz monocromática em seis comprimentos de onda específicos (isolados no range de 530 a 670nm) que passa através da cubeta captada por um foto-detector.

  3. O microcomputador mede Hemoglobina Total (tHb), percentual de Oxihemoglobina (%O2Hb), percentual de Carboxihemoglobina (%COHb), percentual de Metahemoglobina (%MetHb) e percentual de Deoxyhemoglobina (%HHb). • Absorbâncias: • Medida do branco – obtida com seis leituras de absorbância da solução zero (zeroing solution); • Medida da amostra – amostra diluída e hemolisada (sangue, controle ou calibrador) obtida com seis leituras de absorbância;

  4. Cálculo da absorbância – As seis absorbâncias do branco são subtraídas das seis absorbâncias obtidas para a amostra: • A(NET) = A(SAMPLE) – A(BLANK) • Onde A = abs obtida em cada comprimento de onda • Cálculo da concentração: • È calculado através da concentração fracional de várias hemoglobinas presentes na amostra: • A = K1C1+2C2+3C3+......C • C = concentração de diferentes espécies de Hb • K = escala constante utilizada para calibração do processo tHb •  = coeficiente da matrix • A = Valor de absorbância no sangue nos diferentes comprimentos de onda

  5. Concentrações são utilizadas para determinar tHb e percentual relativo de espécies de Hb. • O valor de concentração da hemoglobina total (g/dL) é a soma das quatro concentrações: • CtHb = C(HHb)+C(O2Hb)+C(COHb)+C(MetHb) • Parâmetros de medida ( como todos os parâmetros são calculados): • Concentração de Hemoglobina Total: • A concentração de hemoglobina total é a soma da concentração das espécies de hemoglobina HHb, O2Hb, COHb e MetHb. • Valor de referência para adultos: 12.0 a 18.0g/dL • THb = (HHb+O2Hb+COHb+MetHb) x K

  6. Porcentagem deOxihemoglobina (%O2Hb) • Valor de referência para sangue arterial: 94.0 a 97.0% • %O2Hb = O2HbX 100 • HHb+O2Hb+COHb+MetHb • Porcentagem deCarboxihemoglobina (%COHb) • %COHb = COHbX 100 • HHb+O2Hb+COHb+MetHb

  7. Porcentagem de Deoxyhemoglobina %HHb): • %HHb = HHbX 100 • HHb+O2Hb+COHb+MetHb

  8. Detecção/correção de interferentes: • Detecção de sulfahemoglobina: • Devido a características espectrais do comprimento de onda utilizado no IL 682, a SHb pode interferir em medidas de outras hemoglobinas. A presença de sulfahemoglobina causa um aparente acréscimo de MetHb e um resultado negativo de carboxihemoglobina. EQUIPAMENTO SINALIZAALERTA: • SulfHb Warning – Sulfahemoglobina detectada superior a 1,5%ERROnão liberar resultado. • High SulfHb Warning – equipamento não libera resultado.

  9. Correção de turbidimetria: • Presença de lípides pode interferir na medida de absorbância e afetar os resultados do Co-oxímetro. Existe um sistema de correção automático. • Para valores de triglicérides de aproximadamente 1500mg/dL (acima de 3%) é liberado para o operador uma mensagem de alta turbidimatria . EQUIPAMENTO SINALIZAALERTA: High turbidity – não liberar resultado.

  10. Limitações: • Range Resolução Inexatidão * Imprecisão** • tHb 5-20g/dL 0,1g/dL + 0,3g/dL 0,2g/dL • O2Hb 0-100% 0,1% +1% 0,5% • COHb 0-100% 0,1% +1% 0,5% • HHb 0-100% 0,1% +3% 1,5% • MetHb 0-10% 0,1% +1% 0,5% • MetHb 10-100% 0,1% +10%relative 1,5%

  11. Exatidão definida como 95% dos limites de confiança para amostras com MetHb de 0 – 10% e hemolisadas no PH 7.0 a 7.4; • Precisão de um desvio padrão. • Interferências: • Sulfahemoglobina: Presença de SHb pode causar um aparente aumento de metahemoglobina e um decréscimo de carboxihemoglobina e Oxyhemoglobina • Bilirrubina: pode causar um decréscimo de 1,5% de Oxyhemoglobina e pode ter um acréscimo de 1 a 2% de carboxihemoglobina em um nível de bilirrubina de 30mg/dL. • Turbidimetria: acima de 3% interfere nos resultados • Indocyanine green (marcador de fluorescência): alterações de resultados do equipamento

  12. Azul de metileno: acréscimo de metahemoglobina e diminuição de oxyhemoglobina • Algumas drogas e substâncias que podem alterar hemoglobina a metahemoglobina causando metahemoglobinemia. Sulfahemoglobina podem ser formadas com o uso de certas drogas, causando interferência.

  13. Especificações do equipamento: • Amostra sangue total • Anticoagulante EDTA ou heparina • Quantidade de amostra 65L • Fluxo de reagentes Ciclo: Zero Diluent Cleaning • Sample 0.6mL 0.12mL NA • Prime 2.0mL 0.92mL 0.28mL • Clean 1.3mL 0.27mL 0.34mL • Zero ref. 0.6mL 0.10mL NA • Tempo do ciclo de amostra 58 segundos •  monitorados 535.0nm, 585.2mn, 594.5mn, 626.6mn, 638.3mn, 667.8nm • Temperatura ambiente 15-32º C • Humidade ambiente  90%

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