1 / 17

ELEKTROFORETİK TEKNİKLER

ELEKTROFORETİK TEKNİKLER. Gül AKILLIOĞLU (13-17 Mayıs 2014). Elektroforetik teknikler;. Proteinleri ayırmak Saflaştırmak Karakterize etmek için kullanılan en yaygın teknikler…. Prensip. Yüklü moleküller elektrik alanda hareket ederler. net yük moleküler büyüklük elektrik alanın gücü

tana
Download Presentation

ELEKTROFORETİK TEKNİKLER

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ELEKTROFORETİK TEKNİKLER Gül AKILLIOĞLU (13-17 Mayıs 2014)

  2. Elektroforetik teknikler; Proteinleri ayırmak Saflaştırmak Karakterize etmek için kullanılan en yaygın teknikler…

  3. Prensip • Yüklü moleküller elektrik alanda hareket ederler. • net yük • moleküler büyüklük • elektrik alanın gücü • (+)  anot • (-)  katot

  4. Elektroforez Çeşitleri Kağıt elektroforezi, Selüloz asetat, Jel elektroforezi, poliakrilamid jel (PAGE) agaroz jel Kapiler elektroforez İzoelektrik odaklama İmmünoelektroforez (immunoblotting) Ayrımın gerçekleştiği destek materyalleri genellikle jellerdir.

  5. Poliakrilamid jellerin avantajları; • inerttir, • yüklü grup taşımaz, • kimyasal, fiziksel, mekanik stabiliteye sahiptir, • porozitesi ayarlanabilir. • POLİMERLEŞMEDEN ÖNCE NÖROTOKSİK!

  6. İyi bir ayrım için ortamın pH değeri önemlidir. Bunun için tampon çözeltiler kullanılır. Doğru akım (DC) güç kaynağı kullanılır. Ortam sıcaklığını sabit tutmak için soğutma sistemi vardır.

  7. SDS-PAGE SDS Sodyum dodesil sülfat; anyonik deterjan. SO3- grupları dışarı doğru yönelir, protein molekülleri negatif yüklenir. PAakrilamid monomerlerinin N,N’-metilen-bisakrilamid ile çapraz bağlanmasıyla oluşan polimer. TEMED, APS; katalizör

  8. Proteinlerin ektraksiyonu • Proteinin denatürasyonu • Jelin hazırlanması • (Stacking gel-resolving gel) • Jel üzerinde ayrımın gerçekleştirilmesi • Protein bantlarının boyanması • Sonuçların analiz edilmesi

  9. Örneklerin yüklenmesi http://www.youtube.com/watch?v=XUjLO-ek2C8&feature=endscreen&NR=1 Elektroforezin çalıştırılması http://www.youtube.com/watch?v=IWZN_G_pC8U

  10. İZOELEKTRİK ODAKLAMA Proteinler izoelektrik noktalarının altındaki pH’ larda pozitif, üstündeki pH’ larda negatif yüklüdürler. İzoelektrik noktada net yük SIFIRDIR! Bir tüp içerisindeki jel üzerinde, izoelektrik noktalarına göre ayrılırlar.

  11. 2D PAGE

  12. http://biology-forums.com/index.php?topic=817.0

  13. İmmünoelektroforez (Western Blot) Yöntemin prensibi; proteinlerin elektroforetik ayrımından sonra, aranan proteine karşı antiserum ekleyerek antijen-antikor presipitatlarının gösterilmesidir. Örneklere önce elektroforez uygulanır, sonra antiserum eklenir. Jele difüze olması sağlanır. Simültane difüzyon sonrası antijen-antikor presipitasyon bantları oluşur.

  14. Grafit elektrot Filtre kağıdı Jel Membran Filtre kağıdı Grafit elektrot http://bio-solutions.blogspot.com.tr/2008/07/western-blot.html

More Related