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BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL Semestre 2010-2

BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL Semestre 2010-2. Profesoras M. En C. María del Carmen Parra González ( Edificio E lab105) cparra@servidor.unam.mx Dra. Carmina Montiel Pacheco ( Edificio E lab 102) c armina.montiel@gmail.com www.bqexperimental.wordpress.com. ALGUNAS COSAS A CONSIDERAR. HORARIO.

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BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL Semestre 2010-2

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Presentation Transcript

  1. BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL Semestre 2010-2 Profesoras M. En C. María del Carmen Parra González (Edificio E lab105) cparra@servidor.unam.mx Dra. Carmina Montiel Pacheco (Edificio E lab 102) carmina.montiel@gmail.com www.bqexperimental.wordpress.com

  2. ALGUNAS COSAS A CONSIDERAR HORARIO Tiempolímite de entrada 15:10 LUNES 15:00-19:00 h MIÉRCOLES 15:00-17:00 h Evaluaciónprevía (cadaclase) 15:10 h Retroalimentación 15:25 h

  3. Trabajo de laboratorioeinforme (reportecientífico) INDIVIDUAL (bitácora) EQUIPO paraentregar • Resumen de la introducción • Hipótesisintegrada • Tratamiento de datos (cálculos) • Cuadro de resultados (UNIDADES) • Análisis de resultados • Discusión • Introducción • Hipótesis • Objetivo general o particular • Métodos (Diagrama de Flujo) • Cuadro de registro de datos • yobservaciones • Tratamiento de datos (cálculos) • Cuadro de resultadosy/ográficasyfiguras • Análisis de resultados • Discusión

  4. Trabajo de laboratorioeinforme INDIVIDUAL (bitácora) EQUIPO paraentregar • Referencias (revistas, libros, web) • Cuestionario • Reporte en forma de póster 2 cuartillas • máximo • Referencias (revistas, libros, web) • Cuestionario • Borrador del reporte

  5. CURVA PATRON Y MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS

  6. ESPECTROFOTOMETRÍA Son métodoscuantitativos de análisisquímicoqueutilizan la luzparamedir la concentración de lassustanciasquímicas. Espectrofotométria de absorción visible (Colorimetría) Absorciónultravioleta (UV) Infrarroja

  7. Espectrofotómetro Tungsteno (visible) Deuterio (UV)

  8. LEY DE LAMBERT Y BEER Estableceque la absorbanciaesproporcional al número de moléculasabsorbentes porlasquepasa la luz. A = ε*C*b A = absorbancia C= concentración b=longitud de la celda ε= coeficiente de extinciónoabsortividad molar?

  9. Coeficiente de extinciónoabsortividad molar Es unapropiedadintrínseca de los compuestos. Es unamedida de absorción de luz de lasespeciesquímicas a unadeterminadalongitud de onda Unidades ε=M-1cm-1

  10. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNA • Los métodosmásusuales son: • Absorciónen el ultravioleta. • Reaccióndel Biuret. • Métodode Lowry. • Métodode Bradford.

  11. Absorción en el ultravioleta • Es un método no destructivo. • El intervalo de concentraciónque se puededeterminardepende del contenido de los aminoácidos Tyr yTrp, yoscila entre 0,05 y 2 mg/ml. • La presencia de sustanciasabsorbentes a 280 nm conduce a interferencias.

  12. Método de Biuret Las característicasmásimportantes de la reacción son: La reacción del Biuret se aplica, a partir de los tetrapéptidos, a todos los péptidosyproteínas. Su intervalo de determinaciónes de 1 a 6 mg/ml. No depende de la composición de aminoácidos. Algunoscompuestos (NH4+, Tris, etc.) dan la reacción. Complejoproteína-Cu(II) (Proteína en soluciónalcalina) + NH3 Coloraciónvioleta-púrpura (540nm)

  13. Método de LOWRY REACCIÓN DE BIURET + REACTIVO DE FOLIN-CIOCALTEU (750 nm) Estacoloración se atribuye a la reducción del ácidofosfomolíbdico/fosfotúngstico a azul de heteropolimolibdeno de composición no definida, pormedio de los residuostirosilos, triptofanilos, y en menorgrado, cisteinilosehistidilos de lasproteínasqueforman el complejo con el Cu2+. La intensidad de la coloraciónvaría con la composición de aminoácidos de la proteína. Es más sensible que el ensayo del biuret. El intervaloes de 0,1-1 mg/ml. Presentamuchasinterferencias.

  14. Método de BRADFORD • El rango de determinación de proteínaes de 1-10 mg/ml (ensayo micro) y de 0,5 -1,4 mg/ml (ensayoestándar). • La intensidad de absorcióndepende del contenido de aminoácidosbásicosyaromáticos.

  15. CurvaPatrón Es un marco de referenciaque se construye de cantidadesconocidas de unasustancia (porejemplo la albúminasérica bovina) que se utilizaparadeterminar la cantidad de proteínaspresente en unamuestraincógnita. A280nm A750nm BSA (µg) BSA (µg)

  16. PRECISIÓN Y EXACTITUD • La precisión se refiere a cuántoconcuerdan dos omásmediciones de unamismacantidad. • Ej.Todos los lanzamientos de lasflechasconcuerdan en un puntoque no es la posición exacta • Hay precisión en los lanzamientospero no exactitud. Precisión Alta Baja Baja Exactitud Alta

  17. PRECISIÓN Y EXACTITUD • La exactitudindicacuáncercaestáunamedición del valor real de la cantidadmedida. • Ej.Todaslasflechasalcanzan el centroquees la posición exacta de los lanzamientos.. • Hay exactitudyprecisión en el lanzamiento Precisión Alta Baja Baja Exactitud Alta

  18. PRECISIÓN Y EXACTITUD Se solicitóa tresestudiantesdeterminar la masa de un cilindro de aluminiocuyamasa real es de 3,00 g.

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