300 likes | 803 Views
Enzymologia-12. Przemysłowe zastosowania enzymów. Wykorzystanie enzymów w przemyśle. Udział różnych rodzajów enzymów stosowanych w przemyśle biotechnologicznym. Enzymy proteolityczne w przemyśle. Zastosowanie enzymów metabolizmu cukrów. Produkcja enzymów.
E N D
Enzymologia-12 Przemysłowe zastosowania enzymów
Udział różnych rodzajów enzymów stosowanych w przemyśle biotechnologicznym
Cechy procesów biotransformacji • specyficzność reakcji • regiospecyficzność • stereospecyficzność • wysoka wydajność • łagodne warunki
Metody immobilizacji enzymów • Adsorpcja na powierzchni nośnika (alumina, hydroksyapatyt, kaolinit • szkło, matryce jonowymienne); • Wiązanie kowalencyjne z nośnikiem (poliakrylamid, nylon, celuloza, • dekstran, Sephadex, Sepharose, Agarose, żel krzemionkowy, • kulki szklane). Konieczna aktywacja nośnika; • Sieciowanie międzycząsteczkowe • Czynniki sieciujące: aldehyd glutarowy, 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen; • Uwięzienie w matrycy • - akrylamid polimeryzowany w roztworze enzymu • - żele tworzone in situ w roztworze enzymu; • Kapsułkowanie w membranie półprzepuszczalnej • liposomy, kapsułki nylonowe, celofanowe, celuloidowe, poliuretanowe.
Metody kowalencyjnej immobilizacji enzymów
Przykłady procesów przemysłowych prowadzonych z użyciem immobilizowanych enzymów
homogenna mieszanina • woda/rozp. org. • układ dwufazowy • odwrócone micele • zawiesina enzymu • w rozpuszczalniku org. • kowalencyjnie zmodyf. • enzym w rozp. org. Biokataliza w środowiskach niewodnych
prof. Ernest Sym zapoczątkował na PG badania w dziedzinie biotechnologii; światowy pionier badań nad katalizą enzymatyczną w układach niewodnych.
Reakcje katalizowane przez monooksygenazy wykorzystywane do biotransformacji w praktyce przemysłowej • hydroksylowanie alkanów • hydroksylowane arenów • epoksydacja alkenów • utlenianie heteroatomów • utlenianie ketonów do estrów
Enzymatyczne wytwarzanie L-aminokwasów w układzie sprzężonym
ZASTOSOWANIE ENZYMÓW DO OTRZYMYWANIA OPTYCZNIE CZYNNYCH AMINOKWASÓW Synteza/biosynteza optycznie czynnych pochodnych glicyny – substratów dla otrzymywania penicylin półsyntetycznych
ZASTOSOWANIE ENZYMÓW DO OTRZYMYWANIA OPTYCZNIE CZYNNYCH AMINOKWASÓW Biosynteza optycznie czynnych aminokwasów białkowych
Acylazy penicylinowe • Acylaza penicyliny G • Bakterie Achromobacter spp., Alcaligenes faecalis, E. coli, • Bacillus megaterium, Proteus rettgeri, Pseudomonas melanogenes; • Drożdże Kluyvera citrophila • Acylaza penicyliny V • Grzyby strzępkowe Bovista plumbea, Fusarium spp.; Promieniowce • Actinoplanes spp., Streptomyces levanduae • 3. Acylaza amplicylinowa Obecnie najczęściej stosowane źródło: rekombinowane szczepy E. coli
Wytwarzanie kwasu 6-aminopenicylanowego (6APA) Możliwe metody: hydroliza chemiczna lub enzymatyczna Warunki hydrolizy enzymatycznej Biotransformacja 12-15% (w/v) roztworu soli penicyliny G lub V przez immobilizowaną amidazę penicylinową. Podczas reakcji utrzymuje się pH na poziomie 7 – 8 poprzez dodawanie KOH lub NaOH. Produkty: 6APA oraz odpowiedni kwas (fenylooctowy lub fenoksyoctowy). 6APA izoluje się poprzez zakwaszenie mieszaniny poreakcyjnej do pH = 4.0 w obecności rozpuszczalnika organicznego nie mieszającego się z wodą. W tych warunkach 6APA wytrąca się, a kwas prekursorowy przechodzi do fazy organicznej i jest zwykle zawracany jako dodatek do nowej fermentacji Korzyści z zastąpienia chemicznej hydrolizy penicyliny G do 6APA przez hydrolizę enzymatyczną Eliminacja chlorowcowanych rozpuszczalników organicznych, toksycznych odczynników i odpadów oraz potrzeby stosowania ciekłego azotu do chłodzenia; prowadzenie reakcji w umiarkowanych warunkach; łatwa kontrola pH, temperatury; zwiększenie wydajności, brak produktów ubocznych;
Synteza aspartamu z zastosowaniem biotransformacji enzymatycznej