1 / 14

Petr áš , M. 1 , Kovalská , M. 2 , Tatarková , Z. 1 , Lehotský, J. 1 , Drgová , A. 1

HYPERHOMOCYSTEINÉMIA A JEJ VPLYV NA TVORBU REAKTÍVNYCH FORIEM KYSLÍKA (ROS) A AKTIVITU MnSOD PO ISCHEMICKO-REPERFÚZNOM POŠKODENÍ MOZGU A INDUKOVANEJ ISCHEMICKEJ TOLERANCII. Petr áš , M. 1 , Kovalská , M. 2 , Tatarková , Z. 1 , Lehotský, J. 1 , Drgová , A. 1

terry
Download Presentation

Petr áš , M. 1 , Kovalská , M. 2 , Tatarková , Z. 1 , Lehotský, J. 1 , Drgová , A. 1

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. HYPERHOMOCYSTEINÉMIA A JEJ VPLYV NA TVORBU REAKTÍVNYCH FORIEM KYSLÍKA (ROS) A AKTIVITU MnSOD PO ISCHEMICKO-REPERFÚZNOM POŠKODENÍ MOZGU A INDUKOVANEJ ISCHEMICKEJ TOLERANCII Petráš, M.1, Kovalská, M.2, Tatarková, Z.1, Lehotský, J.1, Drgová, A.1 1Ústav lekárskej biochémie, Jesseniova lekárska fakulta v Martine, Univerzita Komenského v Bratislave, Slovenská republika 2Ústav histológie a embryológie, Jesseniova lekárska fakulta v Martine, Univerzita Komenského v Bratislave, Slovenská republika 14. VĚDECKO-PEDAGOGICKÁ KONFERENCE UČITELŮ BIOCHEMICKÝCH OBORŮ LÉKAŘSKÝCH FAKULT V ČR A SR 30.-31.5.2013 Plzeň

  2. Oxidačný stres a ischemicko-reperfúzne poškodenie • tvorba reaktívnych foriem kyslíka (ROS) a dusíka (RNS) • mozog – nižší obsah antioxidačných mechanizmov v porovnaní s inými orgánmi WARNER, D. S. – SHENG, H. – BATINIC-HABERLE, I. 2004. Oxidants, antioxidants and theischemicbrain. J Exp Biol. 2004, vol. 207, p. 3221-31.

  3. Homocysteín (Hcy) • aminokyselina obsahujúca síru, medziprodukt metylačnej dráhy metionínu, produkt metabolickej premeny metionínu na cysteín • hladina Hcy : 5-15 µmol/l • hyperhomocysteinémia (hHcy) – zvýšená hladina Hcy v krvi => Hcy-tiolaktón spôsobuje tioláciu a homocysteinyláciu proteínov • príčiny hHcy : nedostatok vitamínov B6 a B12, nízka enzymatická aktivita (MTHFR, CBS)

  4. Ischemická tolerancia • aplikácia subletálnej ischémie na tkanivá => rezistencia voči podobnému vážnejšiemu ischemickému inzultu nad prahom poškodenia, (Hirtz et al., 2007)

  5. Ciele projektu • sledovanie vplyvu hHcy na tvorbu ROS, ako aj na zmeny aktivity antioxidačných enzýmov v kombinácii s navodenou ischemickou toleranciou, ischémiou mozgu a rôznym obdobím reperfúzie • sledovanie markerov oxidačného poškodenia lipidov a bielkovín nervového tkaniva indukovanom ischemickou toleranciou (preconditioning) • analýza expresie sledovaných bielkovín metódou Western blot • privedenie k usmerneniu neuroprotektívneho procesu

  6. Materiál a metódy samce potkanov kmeňa Wistar Extrakcia mozgu Homogenizácia Izolácia mitochondrií (6-8 mesačné) imunohistochemická analýza Oxidačné poškodenie Aktivita MnSOD Analýza pomocou lipidov a proteínov Western blotu a imunodetekcia Kontrolná skupina Skupina s navodenou hHcy IR skupina s Hcy a reperfúziou(1,3,24 hodín) IPC skupina s Hcy a reperfúziou(1,3,24 hodín)

  7. Výsledky Oxidačné poškodenie lipidov • štatisticky významné rozdiely v porovnaní s kontrolnou skupinou a Hcy skupinou *** P<0.001

  8. Výsledky Oxidačné poškodenie proteínov • štatisticky významné rozdiely medzi Hcy a kontrolnou skupinou (*** P<0.001) a medzi IR a IPC skupinou (# P<0.05, ### P<0.001)

  9. Výsledky Aktivita MnSODHladina proteínu MnSOD - štatisticky významné rozdiely v porovnaní s kontrolnou skupinou a Hcy skupinou *** P<0.001

  10. Výsledky Aktivita MnSODHladina proteínu MnSOD • štatisticky významné rozdiely medzi Hcy skupinou a kontrolnou skupinou (*** P<0.001) • štatisticky významné rozdiely medzi IR skupinou a Hcy skupinou (*** P<0.001), medzi IPC skupinou a Hcy skupinou (++ P<0.01, +++ P<0.001) a medzi IR a IPC skupinou (# P<0.05, ### P<0.001)

  11. Imunohistochémia kontrolná skupina hHcyskupina Primárna protilátka : anti-SOD2 (A2) mousemonoclonalantibody (SantaCruzBiotech., sc-133134) Sekundárna protilátka : goatanti-mouseIgG (SantaCruzBiotechnology, sc-2005) TR

  12. Závery • hHcy spôsobila zvýšenie peroxidácie lipidov (TBARs) a oxidácie proteínov (dityrozíny). V IR a IPC skupinách neboli pozorované štatisticky významné zmeny v množstve TBARs. • IPC prispel k štatisticky významným zmenám v tvorbe dityrozínovmedzi IR a IPC skupinamipo 3 a 72 hodinovejreperfúzii. • hHcy znížila aktivitu MnSOD, ale zvýšilahladinu proteínu.

  13. Závery • Aktivita MnSOD bola závislá na dĺžke trvania reperfúzie s maximom dosiahnutým po 3 hodinovej reperfúzii. • Western blottovou analýzou bola detegovaná zvýšená hladina MnSOD vo všetkých skupinách. • IPC prispel k výraznému zníženiu aktivity, ako aj hladiny proteínu MnSOD v porovnaní s IR skupinami. • Imunohistochemickou analýzou bola zistená zvýšená imunoreaktivita MnSOD v kortexe v hHcy skupine v porovnaní s kontrolnou skupinou.

  14. Ďakujem za pozornosť Táto práca bola podorená grantom VEGA 1/0027/08 “Molekulové, neurologické a farmakologické korelácie neuroprotekcie a ischemickej tolerancie.” a grantom UK/400/2012 „Vplyv hyperhomocysteinémie na génovú expresiuantioxidačných enzýmov nervového tkaniva po indukovanej ischemickej tolerancii.“

More Related