Absolventul: IMAD EL YAAGOUBI Indrumatori: Sef Lucrari: Conf. Univ. Dr MIHAELA MIRELA BRATU

1. STUDIUL UNOR PREPARATE CU EFECT IMUNOMODULATOR EXTRASE DIN ALGE MARINE Absolventul: IMAD EL YAAGOUBI Indrumatori: Sef Lucrari: Conf. Univ. Dr MIHAELA MIRELA BRATU Cercetator Stiintific principal: Dr MIRCEA CRISMARU

2. INTRODUCERE Algele marine prezinta o complexitate chimica deosebita , putand fi considerate ca surse de mare viitor in industria farmaceutica. Cercetarile efectuate asupra fitoplanctonului Marii Negre se inscriu in linia generala de pe plan mondial , in multe privinte. Lucrarea de fata si-a propus studierea efectului unor extracte de alge marine provenite din Marea Neagra asupra diviziunii leucocitelor . Acest studiu , reprezinta o etapa necesara de evidentiere a efectelor biologice in vitro pe care aceste extracte , prelucrate dupa o metoda originala, le poseda.

3. ALGELE MARINE Algele (incr. Phycophyta) sunt organi-sme vechi, procariote si eucariote , unicelulare si pluricelulare, care au mare raspandire in mari si oceane. Algele marine sunt : aproape toate algele brune ( Cl. Phaeophyceae) , Majoritatea algelor rosii (Cl. Rhodo-phyceae) si unele algi verzi (Cl.Chlorophyceae).

4. PROCEDEU DE OBTINERE A CONCENTRATULUI DIN ALGE MARINE COLECTAREA MATERIEI PRIME SPALARE CU APA DULCE SPALARE CU APA DE MARE La 40-50 °C in etuva SUCURGERE PRIN SITE CU OCHIURI DE 1 CM2 USCARE Moara cu ciocane Apa de spalare in amestec cu Nisip si alte materiale MACINARE Dispozitiv cu site vibratorii SITARE RETICULARE PULBERE FINA CU GRANULATIE 0,15-0,20 FRACTIUNE CU GRANULATIE MARE

5. Analiza organoleptica Aspect Pulbere fina, semifina, cu granulatie intre 0,15-0,20 mm Culoare Bruna-cenusie Miros Specific de organisme marine Gust Specific de iarba uscata CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGELE MARINE(1/3)

6. Substanta uscata, % fata de pulbere 96,70,3 Incalzire la 105 °C (FR X) CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGE MARINE(2/3) Metale grele : Cenusa % 15,00,1 Calcinare la 550°C I. Componente minerale, % fata de pulbere : -alcaline Na,K 25,00,1 II.Flamfotometrie Alcalino-pamantoase Ca, Mg 40,00,1 III.Fe 1205,0 Cv 2,00,4 Mn 450,5 NI 7,10,2 Cu 12,00,1 Zn 98,40,4 Pb 8,70,3 • Analiza fizico-chimica si biochimica a extractului de alge

7. Substanta organica totala,% fata de pulbere 81,00,3 CARACTERIZAREA PULBERI DIN ALGELE MARINE(3/3) Componente organice , % fata de total s.o.: Proteine 4,03,0 Azotat total Kjeldahl Glucide totale 35,03,0 Fenol-acid sulfuric Dumas Lipide totale 10,02,0 Extractie cloroform-metanol Kates Ne-identificate 15,0 Solubilitate in apa , % 6,5-8,0 La 20 °C in raport 1 :10 g/ml Componente hidrosolubile : Proteine, mg/g pulbere 1,50,1 Folin-Ciocalteau Hexoze libere mg/g pulbere 2,07 Activitate enzimatica: Catalaza µmoli H2O2/min/mg proteina 26,500,1 Sinha cu K2Cr207 Superoxid dismutaza SOD U/mg Proteina 0,1500,005 Winterbourn Amilazica m UI/mg proteina 5,00,5 Wohlgemuth • Analiza fizico-chimica (Continuare)

8. METODE • Determinarea β-carotenului s-a facut prin metoda colorimetrica a lui Willstater si Stoll, modificata, folosind ca substanta de referinta β-caroten: sol. 2,5 mg % in benzen. • Acidul ascorbic s-a derminat print-o metoda titrimetrica . Principiul metodei:Acidul acorbic ese oxidat cu ajutorul dicromatului de potasiu in prezenta KI. Excesul de ion dicromat reactioneaza cu ionii iodura , eliberand iod. Cr2O72+ + 9 I- + 14 H+ 3 [I3]- + 2 Cr3+ 7H2O Iodul eliberat coloreaza mediul de reactie cu amidon in albastru

9. Mediu RPMI 1640 (mL) Ser fetal de vitel (mL) Penicilina (UI/mL) Streptomicina (UI/mL) PHA (µg/mL) Alge (µg/mL) Sange (mL) Proba 1 5 0.5 1000 0.25 30 - 0.5 Proba 2 5 0.5 1000 0.25 30 40 0.5 Proba 3 5 0.5 1000 0.25 30 80 0.5 Proba 4 5 0.5 1000 0.25 - 40 0.5 Proba 5 5 0.5 1000 0.25 - 80 0.5 Proba 6 5 0.5 1000 0.25 - - 0.5 TESTUL DE STIMULARE A BLASTIZARII LIMFOCITARE Principiul metodei: Limfocitele din sangele periferic sunt cultivate pe perna de hematii,in prezenta unor molecule cu efect mitogen (fitohemaglutinina,) timp de 72 ore. Sub actiunea mitogenilor (lectine) celulele sufera procesul de transformare si evolutia raspunsului mitotic dende de mitogenul folosit dar si de statusul fiziologic si de tipul celulelor (T sau B) . Fitohemaglutinina stimuleaza blastizarea limfocitelor de tip T. Intensitatea transformarii limfocitelor este determinata prin numararea mitozelor observate dupa blocarea diviziunii celulare cu colchincina si colorarea materialului nuclear cu solutie Giemsa.

10. Componente biochimice Pigmenti -carotenoidici µg/g substanta uscata 060-0,80 Vitamine • Acidul ascorbic mg/g substanta uscata 400-430 REZULTATE • Rezultatul determinarilor chimice si biochimice efectuate: • Curba etalon -caroten

11. Subiectul Nr. PHA 30µg/ml I. S.(%) PHA + EXTRACTUL ALGE I.S.(%) 40µg/ml PHA + EXTRACTUL ALGE I.S.(%) 80µg/ml 1 100 57 ,1 57 ,1 2 100 - 41 ,2 3 100 39,0 146,7 4 100 57,1 57,1 5 100 112,5 200,0 6 100 28,45 25,0 7 100 20,0 71,2 8 100 17,6 33,52 9 100 37,7 71,4 10 100 128,6 142 ,8 Medie 55,33 84,6 Deviatie standard 156,49 253,8 Indice de variabilitate 282,83 300 REZULTATE • Rezultatele asupra mitogenezei limfocitelor animale si umane in vitro:

12. CONCLUZII •   Extractul de alge marine a evidentiat o compozitie chimica complexa , cumprinzind o gamă larga de clase de compuşi chimici ,cantităţi moderate de β caroten şi cantităţi mari de acid ascorbic. • Pentru toate dilutiile luate in lucru , extractul de alge marine a manifestat o activitate clara de inhibitie a mitogenezei limfocitare in prezenta fitohemaglutinina. • Rezultatele obtinute constituie premisa pentru evaluarea aplicabilitatii produsului testat ca agent inhibitor al proliferării celulare in terapia antitumorala.

13. Va Multumesc pentru Atentie